抗体洗脱液配方:取0.5mol/L的Tris-Hcl(pH=6.8)25ml、4g SDS和1.4ml β-巯基乙醇,加纯水定容至200mL。 ⑤ 磷酸化抗体选择 区分非磷酸化的抗体和磷酸化的抗体 一般原则是非磷酸化的抗体既可以识别非磷酸化的蛋白,也可以识别磷酸化的蛋白。磷酸化的抗体只能识别磷酸化的蛋白,而不能识别非磷酸化的蛋白。当然由于...
1、WB相关Buffer配制: 1)NP40裂解液(pH=8.0):50 mM Tris-HCl、150 mM NaCl、1% NP-40(市售); 2)1 M Tris-HCl, pH=7.6 (1000 mL):121.1 g Tris-Base,8000 mL去离子水(dH2O),用1M盐水滴定至pH=7.6,定…
10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0) 1 mmol/L EDTA(pH 8.0) 因为含有以上两种物质，所以称为TE。配制...
–Tris-HCl (pH 8.0) 1 M –1 M Tris-HCl (pH 8.0) 用于配制1× Tris缓冲液 •TAE缓冲液 –50× TAE缓冲液:242 g Tris base、57.1 ml 0.5 M EDTA、114.1 ml 10% 醋酸溶液 (pH 8.0),用去离子水加至1 L –1× TAE缓冲液:将50× TAE缓冲液按需稀释至所需体积 •TBE缓冲液 –10× TBE缓冲...
Tris-Tricine-SDS-PAGE配方如下: 浓缩胶 间隙胶 分离胶 胶浓度 4 % 10 % 15 % 胶体积(mL) 2 1.5 6 37% 甘油(mL) — — 1.63 ddH₂O(mL) 1.51 0.595 — 40% 丙烯酰胺母液(mL) 0.2 0.375 2.25 3M Tris-HCl(pH 8.5)(mL) — 0.5
抗体洗脱液配方:取0.5mol/L的Tris-Hcl(pH=6.8)25ml、4g SDS和1.4ml β-巯基乙醇,加纯水定容至200mL。 ⑤磷酸化抗体选择 区分非磷酸化的抗体和磷酸化的抗体 一般原则是非磷酸化的抗体既可以识别非磷酸化的蛋白,也可以识别磷酸化的蛋白。磷酸化的抗体只能识别磷酸化的蛋白,而不能识别非磷酸化的蛋白。当然由于抗...
抗体洗脱液配方:取0.5mol/L的Tris-Hcl(pH=6.8)25ml、4g SDS和1.4mlβ-巯基乙醇,加纯水定容至200mL。 抗体洗脱液用来去除已结合的抗体,但也会去除部分蛋白,导致蛋白信号变弱。洗脱时可以室温洗脱,30min。既能有效去除已结合的抗体,又能保护目的蛋白。抗体洗脱时膜一定要完全泡在...
1000ml的TBST的配制方法:先称量出40g的NaCl,再加入400ml的ddH2O,再称量出47.6 g NaCl,再加入100 Ml Tris-HCL缓冲液,最后加入吐温20.5ml,放入1000ml容量瓶中定容至1000ml即可。 六、孵育抗体 1.封闭1h后,用PBS将PVDF膜洗净3次,每次5min,再用稀释的一抗(溶解于5%脱脂牛奶,磷酸化蛋白使用TBST溶解的5%BSA)将PV...
Tris-HCl: (1)分离胶(PH8.8)1.5M 称取Tris-base(MW121.14)91.855 g,先ddH2O 400ml,用盐酸调pH=8.8后,定容至500ml (2)浓缩胶(PH6.8)1M 称取Tris-base(MW121.14)60.57 g,先ddH2O400ml,用盐酸调pH=6.8后,定容至500ml 10% SDS 称取10g SDS粉末,溶于入100ml ddH2O即可,可80℃水浴加热,易于溶解。 10...