WB 封闭液的主要作用有哪些?1 封闭非特异性结合位点,减少背景噪音,从而提高检测的特异性和灵敏度。封闭液中含有一些非特异性蛋白质或其他分子,可以与膜表面的非特异性结合位点结合,从而减少抗体与膜的非特异性结合,降低背景信号。2 封闭液还可以起到稳定膜的作用,防止膜在抗体孵育过程中干燥或损坏。3 封闭液...
封闭液中的蛋白可以与固相载体表面的空白位置结合,同样以机械填补(堆积)和吸附覆盖的方式结合在膜上,因为有“填补”和覆盖“蛋白结合位点以避免一抗的非特异性结合,所以有”封闭“的说法。同样这两种作用使封闭液中的蛋白能够狠牢固的结合在空白位置上,这样抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上,而只会跟特异...
wb条带跑开之后,要进行转膜,把跑好的胶片转移到膜上,转好之后需要在转膜仪上转差不多三个小时,三个小时之后关闭转膜仪,把膜打开就会看到胶片上的条带全部都转移到膜上了,然后用泡好的牛奶对膜进行封闭处理,填充膜表面的凹陷,最后用pbs冲洗,这样膜上就是干干净净的条带了,直接可以用来扫膜观察了。 脱脂奶封...
转膜后,膜上其他的空白位置需要用封闭液封闭。Western的灵敏度某种程度上受限于封闭做的好不好。在做Western blot实验中,会用到固相载体(如NC膜,PVDF膜),在这些固相载体表面有很多洞洞,通过电转,胶上的蛋白被转移到膜上,蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的很多洞洞里...