经过多年发展,这一系统也经过了多次优化,现在常用的TRE是由7个长度为19个氨基酸的四环素抗性操纵子(TetO)组成,TRE及下游CMV启动子共同组成了四环素依赖性启动子(Ptet)。而对TetR的改造,使得多种Tet调控系统逐渐发展起来,应用最为广泛的便是抑制型系统Tet-off和激活型系统Tet-on。 Tet-off原理 tTA是由TetR和病毒转...
它通常包括启动子、响应元件、转录调控元件和选择标记基因等部分。在设计tet-on表达载体时,需要考虑以下几个方面: 1. 启动子的选择,tet-on系统通常使用tetracycline响应元件控制基因的表达,因此需要选择适合的启动子来驱动tetracycline转录激活因子(tTA)基因的表达,常用的启动子包括CMV启动子、TRE启动子等。 2. ...
tTA）表达的启动子，反应表达载体由TRE-tight启动子（TRE3g）及目的基因组成。
Tet-off系统包含两个部分结构，第一部分是将TetR与单纯疱疹病毒VP16的转录激活结构域融合，得到可由Tet控制的转录激活因子（tTA）；第二部分是Tet反应启动子（Ptet），这是将TetO序列融合到缺乏增强子序列的最小启动子CMV前面。当没有给与Tet的情况下，tTA与Ptet结合，在转录激活结构域的作用下激活下游基因的表达；当...
element, TRE）、CMV启动子（minimal CMV promoter, PminCMV）及目的基因组成。其中TRE是7个重复的TetO序列。Tet-on原理:rtTA是由tTA突变4个氨基酸形成，它的表型与tTA相反。生理条件下，rtTA与TRE不结合，由于PminCMV缺少增强子，因此目的基因不表达；给于DOX后，DOX与rtTA的结合体与TRE结合，从而启动基因表达。
上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。 Tet-On 3G系统- EF1-Alpha启动子 品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量 Clontech 631363 Lenti-X Tet-On 3G Inducible Expression System (EF1alpha Version) Each ￥22,207 收藏产品 ...
启动子:Tet-responsive 克隆方法:多克隆位点,限制性内切酶 载体大小:3757 bp 载体抗性:Ampicillin (氨苄青霉素) 功能与应用 基因表达调控:pTRE2载体允许在Tet-On™和Tet-Off™系统中进行四环素诱导的基因表达。在Tet-Off系统中,四环素的存 在会抑制基因表达,而在Tet-On系统中,四环素的存在会激活基因表达。
在这两个系统中,四环素(tetracycline)或其衍生物多西环素(强力霉素Dox)控制转录激活子tTA或rtTA与启动子Ptet结合,从而调控下游基因的表达。在基因调控中,tet-off的应用更加广泛,通过是否加入诱导药物(如四环素和强力霉素等),从而实验对目的基因诱导表达的目的。
四环素诱导基因表达系统的关键是四环素反应元件（TRE）和四环素阻遏蛋白（TetR）。经过多次优化，当前常用的TRE由7个长度为19个氨基酸的四环素抗性操纵子（TetO）组成，与CMV启动子结合形成四环素依赖性启动子（Ptet）。通过对TetR的改造，发展出了抑制型系统（Tet-off）和激活型系统（Tet-on）。Tet-off系统...
方法:首先将pAlb-Cre-GH/BS作为模板,PCR扩增目的基因Alb-enhancer/promoter,In-Fusion克隆至Xho I/Xba I双酶切的pLVX-TetOne中,获得Alb启动子替换pLVX-TetOne原有的PGK启动子的质粒pLVX-Alb-TetOne;接着以 pCD823A-1为模板,PCR 扩增 T2A-CopGFP,In-Fusion 克隆至 BamH I/Age I 酶切的 pLVX-Alb-TetOne ...