此外也可以tTA-TRE系统结合Cre - loxP系统,进行光纤钙信号或神经递质信号记录实验,从而在印迹细胞中表达钙指示蛋白GCaMP6m,多巴胺探针DA 3m以及去甲肾上腺素探针NE 2h等元件。例如使用以下病毒进行光纤记录技术:AAV9-c-Fos-tTA-NLS,AAV9-TRE3G-Cre,AAV9-EF1α-DIO-GCaMP6m,这样就是三种病毒同时表达发挥作用。
利用tet-on表达调控载体,包装成工具病毒,最后在实验中即可进行相应的基因操作,可直接感染细胞进行基因的诱导表达;也可注射动物,随后通过DOX的小鼠饲养调控工具病毒是否发挥作用。 体外-诱导型慢病毒使用-细胞实验-tet-on慢病毒 在未加入Dox的时候,目的基因也会有非常微弱的表达,这种表达强度随着Dox的增加而增加。 体内...
01 Tet-on/off 系统作用原理 Tet-off原理 Tet-off原理: tTA是由TetR和病毒转录激活域VP16融合而成的蛋白。当不存在Dox时, tTA和TRE(7个重复的TetO序列)结合,启动下游基因表达;当存在Dox时,tTA的构象发生改变,tTA会TRE上脱落,从而导致下游基因表达关闭。 Tet-on原理 Tet-on原理:rtTA是由rTetR和VP16融合而成...
Tet-off型四环素阻遏系统的工作原理与Tet-on型四环素诱导系统正好相反，无四环素时 基因表达，四环素存在时基因关闭。Tet转录活化因子(tetracycline transcriptional activator, tTA)是由TetR的1-207个氨基酸和单纯疱疹病毒VP16激活结构域的C端127个氨基酸组成。VP16的增加使得TetR由转录抑制因子变为转录激活因子。生理条件下...
TET-on系统是通过引入外源TET蛋白来激活特定基因的表达，而TET-off系统则是通过抑制TET蛋白的活性来关闭特定基因的表达。TET-on系统的工作机制是，当需要激活某个基因的表达时，可以通过病毒载体将TET蛋白导入目标细胞中，这样就能促进目标基因的表达。TET-off系统则是利用反义寡核苷酸（ASO）或特定的抑制...
Tet-off型四环素阻遏系统的工作原理与Tet-on型四环素诱导系统正好相反,无四环素时 基因表达,四环素存在时基因关闭。Tet转录活化因子(tetracycline transcriptional activator, tTA)是由TetR的1-207个氨基酸和单纯疱疹病毒VP16激活结构域的C端127个氨基酸组成。VP16的增加使得TetR由转录抑制因子变为转录激活因子。生理条件下...
Tet-on系统由调节表达载体和反应表达载体组成。调节表达载体包含一个人巨细胞病毒早期启动子(PhCMV)和反义Tet转录活化因子(reverse tetracycline transcriptional activator,rtTA)。其中rtTA由反义TetR(reverse TetR, rTetR)和单纯疱疹病毒(HSV)VP16 蛋白C端的一段转录激活区域融合而成。反应表达载体由Tet应答元件(Tet-...
光遗传学方面，Susumu Tonegawa团队使用“Tet-off”系统结合光敏蛋白标记与恐惧记忆相关的记忆痕迹细胞，光激活后能激活小鼠的恐惧记忆。他们还利用双腺相关病毒系统，在早期阿尔茨海默症小鼠模型中，光遗传学激活海马记忆印记细胞引起记忆提取，表明记忆仍存在，只是无法激活。基因编辑领域，管吉松等人在Nature ...
2000年,Kafri等[g]构建了基于慢病毒载体的Tet—off基因表达调控系统,这种基因表达系统能够有效 控制目的基因表达,扩大了慢病毒载体的临床应用潜能,成为很有前景的基因治疗载体。当前,研究者采用 的大都是双质粒四环素调控系统,即在应用过程中,先将调节质粒(ptTA)整合到宿主细胞系中,经过药物筛 ...
利用上述系统制备的rAAV病毒产品可在有无四环素的调节下，开启或关闭目的基因的表达，可应用于辅助病毒、...