相比而言,农杆菌介导的转化系统仍是比较通用的方法,但是农杆菌系统也存在固有限制,例如难以获得“DNA-free”的株系,转化流程复杂等限制,因此还需要进一步的优化。对于我们研究生来说,搞清楚整个转化的原理很有必要。 最后,祝福大家“转化全是阳性苗” ! *本文参考文献:Integration of Agrobacterium T-DNA into the ...
19、 1. 按如下方法配制按如下方法配制PCRPCR反应体系(管上应写明株号):反应体系(管上应写明株号): 10 xTaq buffer10 xTaq buffer(MgMg2+ 2+ freefree) 2ul2ul MgCl MgCl2 2 2ul 2ul 某株号模板某株号模板DNA 2ulDNA 2ul 引物引物LP 0.5ulLP 0.5ul 引物引物RP 0.5ulRP 0.5ul 引物引物BP 0.5...
10xTaq buffer (MgCl2free) 2μl MgCl2(25mM) 2μl 引物LP/BP*(10μM) 0.5μl 引物RP(10μM) 0.5μl dNTP(各2.5mM) 0.5μl 模板DNA(30-50ng/μl) 2μl Taq酶(5Μ/μl ) 0.2μl 注:*引物LP对应原基因检测体系,BP对应T-DNA插入基因检测体系。 混匀离心后放入PCR仪,PCR过程表2。 表3 PCR...
试剂ddH2O 10×Tap buffer(Mg2+ free) 模板DNA(3050ng/ul) 引物LP(10um) 引物RP(10um) 引物BP(10um) dNTP(各2.5mM) Tap酶(5U/ ul) 反应体系总体积 单管I(μl) 16 2.5 2 1 1 NO 2 0.5 25 20 5 混合I 160 25 10 10 单管II(μl) 16 2.5 2 NO 1 1 2 0.5 25 10 10 20 5 混合II...
水稻中 已建 立 了具 有一定规模的 突变体 库 ,但远 没有 达到饱和 的程 度 .水稻上大约 获得 了 47 932个 T—DNA插入 株 系和 3 290个 水稻 激活标 签转 化子 ,同时 扩增 出 27 621个 侧翼序列 . An等从 6 749个 水稻 标签 系 中分 离了 3 793条 T— DNA侧翼 序列 ,并 建立 了侧翼...
Tks Gflex PrimeSTAR GXL A公司PCR酶 X轴: GC% Y轴:normarized depth (PCR free) 对象生物:E. coli 斜率:0.0003 斜率:0.0018 斜率:-0.0241 ★ 面向illumina公司MiSeq的16S rRNA细菌丛分析用PCR扩增试剂盒(Code No. R161A)也使用Tks Gflex。 HeLa细胞悬浮液起始的PCR实验例请参照第3页。 ※ 以上数据来源...
碧云天生产的T7 DNA Ligase,即T7 DNA连接酶,是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种来源于T7噬菌体的、ATP依赖的双链DNA连接酶,并且对于粘性末端的连接效率远远高于平末端。 与T3和T4 DNA Ligase不同,T7 DNA Ligase仅可催化双链DNA相邻粘性末端5'磷酸和3'羟基磷酸二酯键的形成,但...
拟南芥（Arabidopsisthaliana）又称为阿拉伯芥，是一种十字花科植物，广泛用于遗传、发育和分子生物学的研究，已成为一种典型的模式植物。该植物具有以下特点：植株形态个体小，高度只有30cm左右，1个茶杯可种植好几棵；生长周期快，每代时间短，从播种到收获种子一般只需8周左右；种子多，每株可产生数千粒种子；形态...
本发明可用于生物技术,特别地涉及基因治疗DNA载体GDTT1.8NAS12,大肠杆菌菌株JM110‑NAS,大肠杆菌菌株JM110‑NAS/GDTT1.8NAS12和基因治疗DNA载体GDTT1.8NAS12的工业生产。获得基因治疗性DNA载体GDTT1.8NAS12的方法涉及构建2408‑bp的中间载体,其含有688‑bp复制起点、467‑bp转录终止子hGH‑TA、137‑bp调...
Obtaining Marker Free Transgenic Chrysanthemum Through Double T-DNA System 利用双T-DNA载体系统获得无选择标记转基因菊花 9. Bridge PCR,An Easy Way for Concatemerizing DNA Tags 桥式PCR,一种简易连接DNA标签序列的方法(英文) 10. Construction of T-DNA Insertion Mutagenesis System for Phanerochaete Chrysospo...