本研究利用PCR介导的定点突变技术,构建了shRNA.resistantGanl~yrin抵抗型质粒。经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,抵抗型质粒构建成功;经WesternBlot检测.抵抗型质粒在HEK293T细胞中正确表达,为进一步研究Gankyrin在乳腺癌转移中的作用及其分子机制提供了重要的实验材料。关键词Gankyrin定点突变抵抗型质粒RNA干扰回复中...
本研究利用PCR介导的定点突变技术,构建了shRNA—resistantGankyrin抵抗型质粒。经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,抵抗型质粒构建成功;经WesternBlot检测,抵抗型质粒在HEK293T细胞中正确表达,为进一步研究Gankyrin在乳腺癌转移中的作用及其分子机制提供了重要的实验材料。
2.2 shRNA-resistant Gankyrin表达产物的Western Blot鉴定 经Western Blot检测,抵抗型质粒re-Gankyrin转入HEK293T细胞后正确表达,在26 000 Da附近特异蛋白质条带增强,与Gankyrin蛋白质分子量相符。 图3 shRNA-resistant Gankyrin载体双酶切鉴定结果1—shRNA-resistant Gankyrin载体未经酶切2—shRNA-resistant Gankyrin ...
实验室前期工作发现Gankyrin表达水平与临床乳腺癌转移存在正相关,并可能通过多个环节影响乳腺癌的转移.本研究利用PCR介导的定点突变技术,构建了shRNA-resistant Gankyrin抵抗型质粒.经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,抵抗型质粒构建成功;经Western Blot检测,抵抗型质粒在HEK293T细胞中正确表达,为进一步研究Gankyrin在乳腺...
本研究利用PCR介导的定点突变技术,构建了shRNA—resistantGankyrin抵抗型质粒。经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,抵抗型质粒构建成功;经WesternBlot检测,抵抗型质粒在HEK293T细胞中正确表达,为进一步研究Gankyrin在乳腺癌转移中的作用及其分子机制提供了重要的实验材料。