（参照《分子克隆》二版P884）0.01 MNaOAc (pH5.2) 参照此配方配制。5×Tris-Glycine Buffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）组分浓度：0.125 M Tris, 1.25 M Glycine, 0.5%(W/V) SDS 1．称量下列试剂置于烧杯中。2．加入约900 ml去离子水搅拌溶解。3．定容至1L，室温保存。（参照《分子克隆》二版P884）Tra...
在进行SDS-PAGE电泳时,使用合适的上样缓冲液至关重要。以下是一个简单而有效的5xSDS-PAGE Loading Buffer的配方,帮助你更好地分离和可视化蛋白质。📏 配方组分: 250mM Tris-HCl(pH 6.8) 10%(W/V) SDS 0.5%(W/V) BPB 50%(V/V) 甘油 5%(W/V) β-巯基乙醇🔬 配制步骤: 将1.25mL 1M Tris-HCl、...
凝胶聚合后如有条件,保存12小时后再用,以使凝胶充分聚合,孔径均匀,以改善电泳分辨率。如条件不允许,应至少等1小时再进行电泳。在垂直电泳装置上可进行连续电泳或不连续电泳。连续电泳仅有分离胶,整个电泳使用相同的缓冲系统,所以灌胶十分简便。不连续电泳则需要先灌注分离胶(均一胶或梯度胶),再灌注浓缩胶。按照配方...
2、按照上面配方制SDS-PAGE凝胶,安装好电泳仪,在槽中加入电极缓冲液。 3、按一定顺序在加样孔中加入样品。 4、打开电源将电压调到80v,待样品跑过压缩胶后将电压调到120v至样品电泳到胶底部为止。 5、将凝胶小心取下放入容器中,加入染色液,用摇床摇2-3h 6、待条带清晰后倒出染色液,加入脱色液过夜 7、将脱色...
SDS-PAGE缓冲液配方TBS(pH 7.6)缓冲液配制方法: Tris-base(50mM.)6.05g NaCI(150mM)8.78g 双蒸水加至800ml 用HCl(1N)或NaOH(1N)将pH调至7.6,最后双蒸水加至1000ml。 TBST洗液液配制方法: TBS(pH 7.6)1L Tween-20(0.05%)0.5ml 5%脱脂奶粉配制方法(不含NaN3):(封闭液,一抗、二抗稀释液) TBST200ml...
SDS样品缓冲液(Loading buffer): 通常含有SDS、甘油、溴酚蓝、DTT或β-巯基乙醇(还原剂)等成分。 Marker(蛋白分子量标准) 电泳装置 电泳仪与电源 考马斯亮蓝染色液(或其他染色液) 实验步骤 一、制备SDS-PAGE凝胶 准备分离胶和浓缩胶 按照不同的蛋白质大小,选择合适的分离胶浓度(常见为10-15%)。具体配方如下:...
在进行SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺)凝胶电泳时,蛋白上样缓冲液的选择至关重要。以下是两种常见的5x蛋白上样缓冲液配方,它们的主要区别在于还原剂的选择。🔍 配方差异: DTT配方:使用DTT作为还原剂,能有效打开蛋白质间的二硫键,破坏蛋白质的四级结构,防止蛋白质形成分子间或分子内的二硫键。 巯基乙醇配方...
SDS-PAGE上样缓冲液成分有:SDS、还原试剂(二硫苏糖醇或β-巯基乙醇)、溴酚蓝和甘油。 (1)SDS:是一种阴离子去污剂,作为变性剂和助溶剂。SDS使蛋白质本身的电荷变化被屏蔽,氢键被断裂,疏水相互作用被取消,多肽被去折叠(二级结构被破坏),最后形成椭球形。如果不加,会使电泳条带出现拖尾、纹理现象; (2)还原试剂...