浓缩胶(pH6.7,孔径大)主要作用是使样品浓缩,使样品在未进入分离胶前,被浓缩成很窄的条带,从而提高分离效果。分离胶(pH8.9,孔径小)通过分子筛效应和电荷效应,把样品中的各组分按分子量和电荷的大小而分开。如果要利用凝胶电泳测定某一蛋白质的分子量就必须将电荷效应去掉或减少到可以忽略不计的程度,使...
尤其在不连续凝胶电泳中,集浓缩、分子筛和电荷效应为一体•无电渗作用,只要纯度高,操作条件一致,样品分离重复性好•凝胶透明,有弹性,机械效能好•化学性能稳定,与分离物精不选发202生1版化课件学反应;对pH和温度变化较稳2定 PAGE电泳原理 ➢分子筛效应:分子大小和形状 ➢电荷效应:大部分的蛋白质在...
SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。本实验采用垂直板状不连续系统。所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成。1.样品的浓缩效应 在不连续电泳系统中,含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly,pH8.3)、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl,...
尤其在不连续凝胶电泳中,集浓缩、分子筛和电荷效应为一体•无电渗作用,只要纯度高,操作条件一致,样品分离重复性好•凝胶透明,有弹性,机械效能好•化学性能稳定,与分离物不发生化学反应;对pH和温度变化较稳定 PAGE电泳原理 ➢分子筛效应:分子大小和形状 ➢电荷效应:大部分的蛋白质在pH8.3电泳缓冲液的...
SDSPAGE原理及结果分析技巧.ppt,组分分析 当前20页,共21页,星期一。 谢谢! 当前21页,共21页,星期一。 根据有无浓缩效应,分为连续系统和非连续系统。前者电泳体系中缓冲液pH值和凝胶浓度只有一个,带电颗粒在电场作用下依靠电荷和分子筛效应被分离。后者电泳体系中由于
2、集浓缩、分子筛和电荷效应为一体 无电渗作用,只要纯度高,操作条件一致,样品分离重复性好 凝胶透明,有弹性,机械效能好 化学性能稳定,与分离物不发生化学反应; 对pH和温度变化较稳定 SDS-PAGE原理及结果分析技巧 PAGE 电泳原理 分子筛效应: 分子大小和形状 电荷效应:大部分的蛋白质在pH8.3电泳缓冲液的条件下 带...
浓缩胶(pH6.7,孔径大)主要作用是使样品浓缩,使样品在未进入分离胶前,被浓缩成很窄的条带,从而提高分离效果。分离胶(pH8.9,孔径小)通过分子筛效应和电荷效应,把样品中的各组分按分子量和电荷的大小而分开。 如果要利用凝胶电泳测定某一蛋白质的分子量就必须将电荷效应去掉或减少到可以忽略不计的程度,使蛋白质泳...
2.分子筛效应 蛋白质离子进入分离胶后,条件有很大变化。由于其pH升高(电泳进行时常超过,使Gly解 离成负离子的效应增加;同时因凝胶的浓度升高,蛋白质的泳动受到影响,迁移率急剧下降。此两项变化,使Gly的移动超过蛋白质,上述的高电压梯度不复存在,蛋白质便在一个较均一的pH和电压梯度环境中,按其分子的大小移动。
尤其在不连续凝胶电泳中,集浓缩、分子筛和电荷效应为一体•无电渗作用,只要纯度高,操作条件一致,样品分离重复性好•凝胶透明,有弹性,机械效能好•化学性能稳定,与分离物不发生化学反应;对pH和温度变化较稳定 PAGE电泳原理 ➢分子筛效应:分子大小和形状 ➢电荷效应:大部分的蛋白质在pH8.3电泳缓冲液的...
PAGE应用十分广泛,可用于蛋白质、酶、核酸等生物分子的分离、定性、定量和少量制备,还可测定分子量和等电点等。PAGE根据其有无浓缩效应,分为连续系统和不连续系统两大类。前者电泳体系中缓冲液pH及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场中的泳动主要靠电荷和分子筛效应;后者电泳体系中缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度...