(5 )用水冲洗一下浓缩胶,将其放入电泳槽中。(小玻璃板面向内,大玻璃板面向外。若只跑一块胶,那槽另一边要垫一块塑料板且有字的一面面向外。) (6) 测完蛋白含量后,计算含50ng蛋白的溶液体积即为上样量。取出上样样品至0.5ml离心管中,加入5×SDS上样缓冲液至终浓度为1×(上样总体积一般不超过15μl,...
1、SDS-PAGE电泳用到的试剂有丙烯酰胺(Acr),交联剂(Bio),过硫酸铵(APS)和四甲基乙二胺TEMED。 2、网状立体结构的凝胶,所以我们也叫垂直电泳,因为是定性检测蛋白质,也叫蛋白电泳。 二、SDS-PAGE电泳技术原理 SDS是一种阴离子型去污剂,在蛋白样品液中加入SDS和巯基乙醇后,巯基乙醇可打开二硫键,SDS能打开蛋白质...
将凝固的胶板装入电泳槽内，并在电泳槽内加入SDS-PAGE电泳缓冲液，把胶浸泡一段时间，时间越长越好（防止梳子与胶相连，或胶因湿度不够而萎缩）；（6）点样时，再把梳子拔出来，拔时动作要轻，防止胶齿被拔断。二、SDS-PAGE电泳1、调胶：拔掉SDS胶上的梳子，并用小针调整齿的位置（使它们都平行）。2、点...
SDS电泳具体步骤 一、清洗玻璃板 1、洗洁精轻轻擦洗 2、自来水冲 3、蒸馏水冲 4、筐里晾干 5、梳子用水洗 二、配胶 材料:玻璃板、梳子、架子、枪(100-1000、20-200、2-20)、DDW、30%Arc-Bis、Tris(pH8.8)、Tris(pH6.8)、10%SDS、10%AP、TEMED。 1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧 2、配分离胶 3、...
实验操作 (一)样品制备 将蛋白质样品与5X样品缓冲液(20ul+5ul)在一个Eppendorf管中混合.放入100℃加热5-10min,取上清点样。 (二)分离胶及浓缩胶的制备1将玻璃板、样品梳、Spacer用洗涤剂洗净,用ddH2O冲洗数次,再用乙醇擦拭,晾干; 2将两块洗净的玻璃板之间加入Spacer,按照Bio—Rad MiniⅡ/Ⅲ说明书提示装好...
3、SDS-PAGE实验标准操作流程 （1）清洗玻璃板 一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。（2）灌胶与上样 玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。（操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶）。根据蛋白分子量的不同配制不同浓度...
双向电泳操作步骤(第一向等电聚焦和第二向SDS-PAGE...(1)双向电泳操作步骤(第一向等电聚焦和第二向SDS-PAGE电泳)(一)第一向等电聚焦1.从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解。2.在小管中加入0.01g DTT,
琼脂糖和聚丙烯酰氨凝胶电泳 热度: SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实 验原理和操作步骤 实验原理: SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、 快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来 进行分离的。 SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折 ...
SDS-PAGE 电泳标准操作规程(网上) 3.程序: 3.1. 制胶 3.1.1 组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐,形成空腔,插入塑料框的凹槽中,注意箭头向上,并确保下 端平齐。放于制胶架上夹紧,下端紧贴密封条。 3.1.2 分离胶的配置 3.1.2.1 10%分离胶配方如下表: 10%胶 蒸馏水 30%Acr-Bis(29:1 1.5M Tris-Hcl ...
器材:电泳仪,电泳槽,水浴锅,摇床。 实验操作 (一)样品制备 将蛋白质样品与5X样品缓冲液(20ul+5ul)在一个Eppendorf管中混合。放入100℃加热 5-10min,取上清点样。 (二)分离胶及浓缩胶的制备1 将玻璃板、样品梳、Spacer用洗涤剂洗净,用ddH2O 冲洗数次,再用乙醇擦拭,晾干; 2 将两块洗净的玻璃板之间加入Sp...