1、Western blot实验技巧之蛋白样品制备、SDS-PAGE胶制备、跑电泳、转膜、孵育抗体、显影和ImageJ分析(来自一位可稳定重复WB结果的科研狗之四年经验总结) 2、“玄学”实验-Western blot的内参你选对了吗? 3、SDS-PAGE凝胶制备技巧,易翻车点及其解决方法汇总(五年经验结晶) 4、石蜡切片和冰冻切片之高质量HE染色、...
SDS-PAGE 的目的是根据蛋白质的大小而不是其他物理特征来分离蛋白质。为了理解这是如何工作的，我们必须理解名称的两半：SDS 和 PAGE。SDS 由于我们试图分离许多不同形状和大小的不同蛋白质分子，我们首先希望它们变性，以便蛋白质不再具有任何二级、三级或四级结构。分子的 3D 结构将决定它在环境中移动的能力。我们...
首先通过SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳使蛋白质样本分离,再将凝胶上的蛋白电泳转移到固相载体上(NC膜或者PVDF膜),方便后续印迹显影操作,然后使用封闭液将封闭非特异位点,以避免抗体的非特异性吸附,这样固定的蛋白质即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用。最后通过化学发光法或荧光方法进行蛋白条带显影。 其中SDS聚丙烯...
这是因为在SDS-PAGE电泳中,蛋白质在电场中受到两个主要因素的影响:电荷和凝胶孔隙大小。 SDS的作用:SDS(十二烷基硫酸钠)是一种表面活性剂,它可以与蛋白质结合并使蛋白质带负电荷。SDS与蛋白质的结合比例是1:1,使得蛋白质的电荷密度与其相对分子质量成正比。 因此,无论蛋白质的原始电荷如何,经过SDS处理后,所有蛋...
PAGE胶主要分成两个作用,一个是分离胶的作用,另一个是浓缩胶的作用。 浓缩胶的作用:样品和浓缩胶中的氯离子形成的界面泳动,成为先导界面,甘氨酸分子组成的尾随界面。在移动界面的两个边界之间,是一个电导较低,而电位梯度较陡的区域,他可以推动样品的蛋白质前移之分离胶的前沿。
在蛋白质SDS-PAGE电泳过程中，不同分子质量的蛋白质迁移速率不同，相对分子质量较大的蛋白质在电场的作用下迁移较慢，电泳结束后仍然靠近点样孔；而低分子质量的蛋白质迁移速率较快，电泳结束后处于离点样孔较远的位置。经银染或考马斯亮蓝等方法染色后，便可以观察到凝胶上蛋白质条带的大小、数量和分布情况。百泰...
握蛋白质电泳检测常用技术:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE),以及聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue,R-250)染色技术。同时此实验还要学生掌握如何检测分析蛋白原核表达的状态,即判断蛋白原核表达部位:培养液(medium)、可溶性胞质部分(soluble fra...
上样与SDS-PAGE凝胶电泳 1 蛋白上样缓冲液的选择 蛋白样品准备后,需要混合加入蛋白上样缓冲液,主要具有指示和沉降作用,以方便随时观察电泳进度和将携带的样本沉降至凝胶底部。 (A)蛋白上样缓冲液主要成分: 一般情况下都可对蛋白样品进行还原和变性处理...
western blot是通过聚丙烯酰胺电泳(SDS PAGE)将蛋白质按照分子量大小分离,再转移到膜上,最后通过一抗、二抗以及显色液对蛋白进行特异性标记的方法。今天给大家分享一下实验过程中的小细节～♥️样品处理细胞样品加入裂解液后冰浴10min,用枪头搅几圈后吸出至新的EP管中。组织样本剪碎后加入裂解液冰上超声,直至...
蛋白质分子量正确与否往往预示着蛋白质的结构和功能正确与否。测定蛋白质分子量的方法有很多,SDS-PAGE是主要方法之一,也是实验室使用最普遍的一种。在SDS-PAGE中,已知分子量的标准蛋白质和未知样品同时电泳。染色后,根据标准蛋白质的相对迁移率和分子量的对数,可得到一条标准曲线,利用未知样品的相对迁移率可在标准...