1、Western blot实验技巧之蛋白样品制备、SDS-PAGE胶制备、跑电泳、转膜、孵育抗体、显影和ImageJ分析(来自一位可稳定重复WB结果的科研狗之四年经验总结) 2、“玄学”实验-Western blot的内参你选对了吗? 3、SDS-PAGE凝胶制备技巧,易翻车点及其解决方法汇总(五年经验结晶) 4、石蜡切片和冰冻切片之高质量HE染色、...
TEMED最后加,加入后,聚合反应开始,应立刻混匀溶液进行灌胶。 3:灌胶 1ml的枪头缓慢加入分离胶,灌胶的时候注意要给浓缩胶留出一定的空间,一般到灌胶槽的绿色横截面上,灌胶完成后,最上层加水,使分离胶的胶面变得平整。等待30分钟以便充分聚合 30分钟后倒掉上层的水 用离子水清洗胶顶去除未聚合的聚丙烯酰胺。 4...
运行 SDS-PAGE 时，我们不能让蛋白质电泳运行太久，以免到达凝胶的另一侧。我们关掉电流，然后对蛋白质进行染色，看看它们在凝胶中移动了多远。图 5 显示卡通凝胶，图 6 显示真实凝胶。请注意，实际条带大小相等，但每个条带内的蛋白质大小不同。图 5. 电流开启一段时间后然后关闭后 SDS PAGE 的顶视图。 凝胶...
1. SDS-PAGE电泳完成后,取出凝胶,去离子水漂洗1次。 2. 取出凝胶到合适的塑料盒中,加入染色液浸没凝胶,室温摇床上染色30min。 3. 观察染色蛋白条带,取出染好色的凝胶,转移到新的塑料盒中,去离子水漂洗至条带清晰后,可以进行观察和拍照。染好色的凝胶可以保存在去离子水中。 4. 使用过的染色液,可以回收使用...
SDS-PAGE凝胶电泳的主要步骤 01 先制备和灌注分离胶制备分离胶需要两块玻璃板,一个短板,一个长板,将两块玻璃板夹在制胶架上(图5),灌胶完成后,加异丙醇赶走凝胶上面的气泡。关于灌胶的高度,这可以通过放置梳子确定,一般大约梳子下1cm,用笔标记制胶的高度,开始灌胶,加异丙醇封胶。等待胶凝固后,倒掉上层异丙醇...
主营商品:裂解液、显色液、预制胶、转膜液、总rna提取、酶法测定、ecl发光液、supereclplus、eb替代染料、电转缓冲液、细胞膜蛋白、配胶试剂盒、超敏发光液、硝酸纤维素、检测试剂盒、细胞核蛋白、缓冲液粉末、ELISA试剂盒、外泌体提取试剂、铁离子检测试剂盒、转染试剂、膜再生液、抗体稀释液、葡萄糖含量测定试剂...
9.电泳染色液注意进行回收再利用,一般可重复使用2-3次。 10.AP和TEMED是催化剂,加入的量要合适,过少则凝胶聚合很慢甚至不聚合,过多则聚合过快,影响倒胶。 四、常见问题分析 1.配胶缓冲液系统对电泳的影响? 在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳...
1. 银染主要出现在胶的表面,用薄胶(0.5-0.75mm)可以提高灵敏度。 2. 对于考马斯亮蓝染色的胶,可用甲醇将胶漂洗后,继续进行银染。乙酸会干扰银染,因此要确保将凝胶中的乙酸彻底洗净。如果凝胶被过度银染,可用Rapid Fix脱色,并用考马斯亮蓝二次染色。
上样与SDS-PAGE凝胶电泳 1 蛋白上样缓冲液的选择 蛋白样品准备后,需要混合加入蛋白上样缓冲液,主要具有指示和沉降作用,以方便随时观察电泳进度和将携带的样本沉降至凝胶底部。 (A)蛋白上样缓冲液主要成分: 一般情况下都可对蛋白样品进行还原和变性处理...
PAGE),简称SDS电泳[1],主要用于蛋白质亚基分子量测定。SDS凝胶电泳是定量、比较和识别蛋白质的常用方法。具有经济、速度、重复的特点。它可以根据蛋白质的分子量来分离。 在现在的蛋白染色方法中,考马斯亮蓝染色法是最为常用的[2],虽然这种方法染色时间较长,但是其染色效果好,又比较简便,且银染法染色虽然灵敏度很...