SDS-PAGE电泳,全称为SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,是一种常用的蛋白质分离技术,聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N’一亚甲基双丙烯酰胺(Bis)在催化剂过硫酸铵(APS),N,N,N’,N’四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳。 解析: 1、SDS-PAGE电泳用到...
在完成SDS-PAGE的制胶与灌胶后，接下来便是电泳过程。这一系列步骤对于确保实验的顺利进行至关重要。首先，是制胶环节。必须严格按照预定配方进行精确配胶，并确保充分混匀。任何混不匀的情况都可能导致胶体无法正常凝固，或样品在电泳过程中发生歪斜。现在，通常使用现成的试剂盒，使得上下胶可以同时制备，简化了操作...
在电泳槽中加入适量的跑胶缓冲液(Running buffer),确保完全覆盖凝胶表面。 用微量移液器将样品缓慢加入到凝胶的样品孔中,避免漏入其他孔。 运行电泳 设置电泳条件:在浓缩胶阶段(约80 V)跑至样品进入分离胶,然后提高电压至120-150 V进行分离胶电泳,直到染料前沿接近凝胶底部。 电泳时间通常为1-2小时,取决于凝胶大...
将凝固的胶板装入电泳槽内，并在电泳槽内加入SDS-PAGE电泳缓冲液，把胶浸泡一段时间，时间越长越好（防止梳子与胶相连，或胶因湿度不够而萎缩）；（6）点样时，再把梳子拔出来，拔时动作要轻，防止胶齿被拔断。二、SDS-PAGE电泳1、调胶：拔掉SDS胶上的梳子，并用小针调整齿的位置（使它们都平行）。2、点...
用水冲洗一下浓缩胶,将其放入电泳槽中(小玻璃板面向内,大玻璃板面向外)。若只跑一块胶,那槽另一边要垫一块塑料板且有字的一面面向外。 测完蛋白含量后,计算含50μg蛋白的溶液体积即为上样量。取出上样样品至0.5ml离心管中,加入5×SDS上样缓冲液至终浓度为1×。上样总体积一般不超过15μl,加样孔的最...
灌胶时开始可快一些,胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下,这样胶中才不会有气泡。加水液封时要很慢,建议用喷壶喷洒,否则胶会被冲变形。未聚合的丙烯酰胺具有神经毒性,操作时应该戴手套防护。 插入梳子:梳子插入浓缩胶时,应确保没有气泡。注意给积层胶留出足够的空间(分子克隆推荐长度为...
电泳缓冲液加满,进行电泳 三、电泳 注意正负极的连接,可以采用80V的电泳 观察到经过一段时间的电泳,蛋白的样品已经跑到了浓缩胶与分离胶的界面上。这个时候电压改成110V,继续电泳,直至条带跑到电泳板的底部 四:染色与脱色 凝胶放在染色液中染色,该步骤在摇匀板上完成 ...
一、SDS-PAGE凝胶电泳原理 SDS-PAGE凝胶电泳是将蛋白样品加入样品处理液(SDS和巯基乙醇)中,并进行高温加热处理,使蛋白变性,多肽链内部和肽链之间的二硫键打开,使肽链呈现开放状态。打开的肽链通过疏水作用与SDS结合,带有负电荷,在电场的作用下向正极迁移。由于不同大小的肽链在迁移过程中受到的阻力不同,它们逐渐分离...