在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中，不同蛋白质的迁移率仅取决于其分子量。利用考马斯亮蓝快速染色，可以实时观察电泳分离的效果。因此，根据电泳结果可以预估表达蛋白的分子量，从而筛选出阳性表达的重组体。试剂 为进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表达蛋白的实验，需要准备以下试剂：(1) 30%储备胶溶液：包含丙烯酰胺(Acr...
SDS-PAGE缓冲液: 凝胶制备缓冲液、跑胶缓冲液(Running buffer) SDS样品缓冲液(Loading buffer): 通常含有SDS、甘油、溴酚蓝、DTT或β-巯基乙醇(还原剂)等成分。 Marker(蛋白分子量标准) 电泳装置 电泳仪与电源 考马斯亮蓝染色液(或其他染色液) 实验步骤 一、制备SDS-PAGE凝胶 准备分离胶和浓缩胶 按照不同的蛋...
实验用品（溶液配制说明详见文章下方）蛋白样品，SDS-PAGE loading buffer，PBS，Tris-Hcl (PH 8.8)， Tris-Hcl (PH 6.8) ，30%丙烯酰胺，10%SDS，10%过硫酸，5×SDS-PAGE电泳缓冲液，考马斯亮蓝R-250染色液，脱色液。实验步骤一、凝胶配置1．分离胶的配制（1）找出配套的胶板，用擦镜纸擦干净，并固定...
聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(APS),N,N,N',N’-四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳。 2.1 电泳缓冲液(1000ml配方) 2.2考马斯亮蓝染色液(1000ml配方) 2.3 脱色液(1000ml配方) 2.4 ...
SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色及脱色 原理:十二烷基磺酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种蛋白表达分析技术。SDS是一种阴离子表面活性剂,与蛋白质充分混合后破坏蛋白质的二级和三级结构,使蛋白质完全变性并带上负电荷。PAGE包含浓缩胶和分离胶,样品首先通过浓缩胶,使样品中所有SDS多肽复合物在分离胶表面聚成一条很...
考马斯亮蓝R-250尤其适用于SDS-PAGE电泳微量蛋白质的染色。 组分规格 考马斯亮蓝R-250染色液250mL 考马斯亮蓝R-250脱色液250mL×3 保存:室温,有效期1年。 按常规方法进行蛋白电泳。 凝胶电泳停止后,切除浓缩胶,转移分离胶至染色容器中。 倒入30～40mL考马斯亮蓝R-250染色液(大约胶的5倍体积以上),摇床上缓...
这种预染色的蛋白质标记可以在电泳期间或转移膜时直接观察到。如何读取 SDS-PAGE 结果？电泳后，肉眼无法直接观察到蛋白质分离，需要后续的染色技术。考马斯亮蓝染色和银染是常规检测和定量电泳分离蛋白质的常用方法。经过固定-染色-脱色等简单处理后，可以清楚地观察到蛋白质的分布。随着高灵敏度蛋白质分析方法和蛋白质...
SDS-PAGE凝胶电泳中蛋白染色液操作步骤详解 是一种即用型考马斯亮蓝蛋白染色液,用于PAM凝胶染色,无需固定、脱色等复杂操作,整个操作可在1小时内完成,染色10到15分钟就能看到蛋白条带,而背景几乎无色。染色液具有极高的灵敏度,过夜染色时,检测上限可达10ng。不含甲醇和乙酸等有毒或挥发成分,保证操作者的健康。且...
在染色盘中加入考马斯亮蓝R250染色液,至水平摇床上摇动1小时或过夜。弃去染色液(染色液可以回收使用),加入适量脱色液,水平摇床上脱色20分钟,更换脱色液3-5次,至凝胶背景透明,蛋白质条带清晰为止。脱色后的凝胶置于白色背景下,用直尺测量蛋白质条带迁移距离(以分离胶顶端为原点)。凝胶在脱色液中有些收缩,将凝胶转...
(1) 制备10%的分离胶(梳子插进去 往下1cm,划线) (2)加1ml蒸馏水(液面压平,排气泡) (3) 制备5%的浓缩胶 样品处理 点样 电泳 浓缩胶(80v);分离胶(120v, 30mA) 染色 染色液:0.29 g考马斯亮蓝R250溶解在250ml脱色液中 脱色 脱色液:250 ml 乙醇,80ml冰醋酸,用蒸馏水定容至1000 ml 板书...