(2)PCR技术是体外扩增DNA的技术,原理是DNA复制。延伸的温度为72℃左右,复性的温度为50℃左右,变性的温度一般为90℃以上,所以延伸的温度大于复性,小于变性。为了让DNA双链充分解离,与引物更好地结合,在循环之前,常要进行一次预变性。(3)在引物作用下,DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链,所以引物的结合部位是DNA...
(1)新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是一种RNA病毒,进行新冠病毒的核酸检测,需要将病毒的RNA逆转录成cDNA,再进行PCR技术进行DNA的扩增。(2)血清抗体检测方法的灵敏度高,是因为检测过程中反复进行了抗原和抗体的特异性结合。根据文中叙述,“P线与S线都变红色,则为阳性”,根据题干信息和图分析,在金标垫、P线与S线上...
图10:实时荧光定量PCR原理图,图片来源[7],红字为增加的说明 在使用TaqMan荧光探针的实时荧光定量PCR过程中,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;探针被酶切降解后,荧光基团和淬灭荧光基团分离,荧光信号并荧光监测系统监测到。 注意看标注的过程②,探针是被DNA聚合酶水解掉的。整个过程中DNA聚合酶(Taq)...
与PCR 相比,对侧流抗原测试灵敏度降低的担忧导致考虑替代方法和概念。为了评估这些新诊断概念的质量,首先要根据要检测的每毫升贼小病毒颗粒浓度来定义目标灵敏度,该值如何与每毫升噬菌斑形成单位 (PFU mL-1) 和RT-PCR对循环阈值 (Ct) 值的校正可能是什么。人们认为传染性在症状出现前 2-3 天开始,人们在症状出...
荧光定量PCR是分子诊断主流技术,包括核酸提取和PCR扩增两个环节,两者共同决定了该检测方法的评测参数。以最直观最关键的检测灵敏度指标来看,只有实现了提取环节最优化和PCR扩增环节最优化的情况下,检测灵敏度的结果才更可信。检测灵敏度显示了检测试剂的检测下限,对于
RT-PCR分析表明,敲除G3BP1基因也可提高培养液上清中的病毒基因组RNA水平。此外,在A549细胞中敲除G3BP1会导致病毒复制增加,而G3BP1表达则可有效的逆转该现象。最后,使用肺泡细胞敲除G3BP1小鼠感染病毒,发现感染三小时后相较于野生型...
新冠病毒的遗传物质为RNA,而PCR扩增的是DNA,因此新冠病毒的RNA需要先逆转录形成DNA才能进行PCR扩增。②抗原检测利用的是抗原和抗体能特异性结合的原理。该过程需要大量抗体,因此需要利用动物细胞融合技术生产高特异性的单克隆抗体。③根据题意,若检测结果为阳性,则在结合垫(新冠病毒抗原和抗体结合)、T线(鼠抗人IgG...
利用等温扩增策略替代传统PCR的相关研究,例如环介导的等温扩增 (LAMP)、重组酶聚合酶扩增和基于核酸序列的扩增、CRISPR-Cas系统的整合,能够减轻对温度控制仪器的需求并缩短检测时间,从而促进资源有限地区的SARS-CoV-2诊断。然而,上述方法通常需要...
原理 实时荧光RT-PCR核酸检测技术是建立在普通PCR技术基础上的。 PCR技术是最常见的扩增目标核酸片段的方法之一,包括变性、退火、延伸三步骤: 变性阶段通过升高体系温度使DNA双链分离; 退火阶段通过降温使原先被一同加入体系的、能与目标片段两端互补的引物与单链DNA结合; ...