RT-PCR，即 逆转录PCR，也被称为反转录-PCR，是聚合酶链式反应（PCR）的一种重要变形，被广泛应用于分子生物学领域。在RT-PCR的过程中，RNA链被逆转录成与其互补的DNA链，随后以这条DNA链为模板，通过PCR技术进行DNA的扩增。这一技术为研究 基因表达、基因突变等提供了有力的工具。【 qPCR与Real-time-P...
逆转录(Reverse Transcription)是以RNA为模板,在逆转录酶的催化作用下,合成RNA/DNA杂合双链,然后水解杂合双链中的RNA,得到互补的单链cDNA的过程。得到的cDNA单链可以作为扩增模板,合成双链DNA。cDNA的合成可以用于后续的PCR实验、qPCR实验、基因检测、基因工程...
如果用于区别同源性高的序列,以及进行SNP分型解析等多重PCR检测,那么就只能用荧光探针法。而进行除此之外的RT-qPCR实验,都可以使用荧光染料法。 表1.DNA结合染料法和TaqMan探针法对比 二、实验步骤 图5.RT-qPCR实验步骤示意图,图片来源:http://bing.com 1.设计引物 RT-qPCR的第一步是对靶基因设计特异性的引物...
为了保持与实际检测样品间的扩增效率的一致性,作为标准品应尽量选择与实际检测样品结构近似的样品。以基因组DNA为模板时就要选择基因组DNA作为标准品;进行mRNA表达解析时最好选择表达目的基因的Total RNA(或以Total RNA为模板合成的cDNA)作为标准品。即使扩增碱基序列相...
RT-qPCR的原理、步骤和数据分析全解析,让你轻松上手!📚 基本概念和原理: RT-qPCR,即反转录定量PCR,是一种将RNA逆转录为cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增的技术。🔬 实验步骤: 逆转录:将RNA逆转录为cDNA。 PCR扩增:以cDNA为模板,进行PCR扩增。 实时定量:通过荧光染料或探针,实时监测PCR扩增过程,获取基因表达...
生信写作是每个“SCI人”都走过的路,在这个训练营中,解螺旋将手把手带你解析生信课题设计思路、介绍生信常用工具清单、解读典型生信文章案例,让你轻松掌握单基因生信设计框架! 零代码生信思路+单基因分析套路相结合,快速搭建文章框架,是生信小白必学的入门级内容!
参考:SYBR Green I 法原理/优缺点/常见问题解析 SYBR Green是双链 DNA 结合染料,在 PCR 反应体系中,Sybr 荧光染料特异性地掺入DNA 双链与双链 DNA 结合后,发射荧光信号,而不掺入双链中的 Sybr 染料分子不发射任何荧光信号。从而保证与 PCR 产物的增加完全同步。
对染色质构象的深入研究已成为准确解析基因功能的一个关键切入点,也是当前基因组学研究所面临的一个巨大挑战。 在酸谈实验室,猫大老师会为大家详细讲解电镜检测、3C两大染色质检测技术。 1、电镜检测 透射电子显微镜是以图像方式提供样品的检测结果,其成像的决定因素是样品对入射电子的散射,包括弹性散射和非弹性散射两...
PCR技术在实验室中被广泛应用，从基因鉴定到信号通路验证，几乎每周都会成为科研的常规手段。然而，众多相似的PCR技术名称让人困惑，如PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR和Real-Time PCR。本文将逐一解析这些技术的区别。首先，PCR，全称聚合酶链式反应，由Mullis于1985年发明，用于在体外快速扩增特定DNA片段。它...