1从供体生物特定分化型组织或细胞中提取纯化总RNA,其中目的mRNA为高丰度mRNA;2以Oligo(dT)为引物,以总RNA中的总mRNA为模板,在反转录酶作用下合成互补的总cDNA;3变性:升温至94~95°C加热5min,使总mRNA : cDNA的杂交链由于热变性而分开成单链;4退火:降温至40~60°C,加入“上游”寡核苷酸引物和“下游”寡核苷...
RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avian myeloblastosis virus，AMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murine leukemia virus，MMLV）反转录酶。在完成逆转录过程之后，通过PCR进行定量分析的时候，随着技术的...
问答题 【简答题】简述猪瘟病毒的RT-PCR诊断操作方法与步骤是什么? 答案:通过流行病学调查、临床症状观察和病理剖解情况进行猪瘟的初诊后,采取病变严重的器官组织。在实验室对采取组织进行研磨离心,抽... 点击查看完整答案手机看题 你可能感兴趣的试题 问答题 【简答题】对新城疫抗体的免疫监测有何意义? 答案:...
实时荧光定量PCR仪器的核心组件之一是热循环装置，它能够控制PCR反应体系的温度变化。热循环装置通常由Peltier温度控制模块构成，能够快速、精确地调节反应体系的温度，通常包括加热和冷却功能，能够在不同的PCR反应步骤中（如变性、退火、延伸）快速切换温度，以满足PCR反应的要求。光学检测系统 实时荧光定量PCR仪器配备了高...
操作步骤 1、从RNA（或mRNA）反转录合成cDNA第一链：2、于95℃加热5～10min，灭活反转录酶，使RNA—cDNA杂交体变性，然后迅速冰浴冷却：3、PCR扩增：方法基本同PCR。cDNA第一链合成方法：20ul反应液中含10xPCR扩增缓冲液，2ul；四种dNTP（10 mmol/L）2ul；RNA酶抑制剂20U；mRNA，l～2ug（或RNA 5-10ug...