通过 PCR 反应生成双链 DNA,TB Green 与双链 DNA 结合发出荧光,通过检测PCR 反应液中的荧光信号强度,可以对目的基因进行准确定量,同时还可以测定扩增的目的 DNA 片段的融解温度。 反应体系的配制和PCR仪还有关系,不同的PCR仪,配制PCR 反应液可能不同,具体参照试剂的说明书和按照不同仪器的操作手册提供的方法操作。
RT-PCR方法检测甲型H1N1流感操作规程 (一)RNA提取 1、根据标本数量分装RLT液:从Kit中取出RLT液,用1.5mL离心管分装,每管500μL(在体系配制区操作)。 2、在生物安全柜内将采样液(鼻拭子、咽拭子、胸水等)或病毒培养物(鸡胚尿囊液或细胞培养液)取100μL加入RLT液管中,充分混匀。 3、每管分别加入5μL β...
本试剂盒基于一步法RT-PCR技术,选取新型冠状病毒2019-nCoV ORF1ab和N基因作为扩增靶区域,设计特异性引物及荧光探针用于标本中新型冠状病毒RNA的检测;本试剂盒同时包括内源性内标检测系统,用于对标本采集、核酸提取过程及PCR扩增过程的监控,可减少假阴性结果的出现...
图1.荧光定量PCR检测方法 第二种方法使用荧光团标记的序列特异性 DNA 探针。 多种化学物质用于检测。 最流行的类型使用 Taq 聚合酶的 5'-3' 核酸外切酶活性来分解寡核苷酸,该寡核苷酸分别在 5'- 和 3'- 末端具有荧光团和猝灭剂。 聚合酶的核酸外切酶活性有助于将荧光团与猝灭剂分离,从而增加荧光。 但是,如...
方法:分光光度计测定、凝胶电泳法 3. 反转录 是以RNA为模板合成cDNA的过程。在这个过程中遗传信息的流动方向和转录时相反,所以称为“反转录”。在这个过程中需要一个反转录酶,合成的DNA称为与RNA互补的DNA(complementary DNA, cDNA)。这个过程中根据不同的情况选择不同的反转录引物,如果要检测的RNA有poly A尾巴...
方法简介 所谓的实时荧光定量PCR 就是通过对PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量PCR 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 PCR 反应的进行,PCR 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环 ...
荧光rt-pcr检测方法是一种利用逆转录聚合酶链式反应(rt-pcr)技术检测病毒核酸的方法。它可以通过荧光素或染料标记引物来检测靶标序列的扩增情况。 该方法的原理是将病毒RNA先通过逆转录酶转录成cDNA,随后通过聚合酶链式反应(PCR)将cDNA扩增。同时使用荧光素或染料标记的引物,使得扩增的靶标序列与荧光素或染料相结合,...
实时荧光定量PCR是基于PCR技术的一种检测方法,通过在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的积累来实时监测PCR产物的生成。在PCR扩增过程中,荧光基团被嵌入到扩增产物中,随着产物量的增加,荧光信号也相应增强。通过荧光信号的实时监测,可以实现对起始模板的定量分析。 基因表达调控研究实时荧光定量PCR技术可以用于研究基...
以下两种方法,相信大家都知道的:1)检测 RNA 溶液的吸光度280 、 320 、230 、260nm 下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶 液浑浊度)、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的,我们只看 OD260/OD280 (Ratio , R)。1.82.0 时,我们认为 RNA 中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容 忍的,不过要注意,当你用 ...
RT-PC略以RNA为棋板的cDNA合成同PCR吉合在一起,提供了一种分析基因 表达的快速灵敏的方法。RT-PC闻于对表达信息进行检测或定量。另外,这项技 术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCRt其他包括Northern印迹、RNase呆护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术,更灵敏,更易于操作。