4、RT-qPCR，2019新冠核酸检测所配置的体系试剂当中，必然会加入逆转录酶。因为RNA病毒必须逆转录为DNA，才能进行PCR反应。M-MLV逆转录酶 DNA聚合酶 定义：它是以DNA为模板，从DNA5'端复制到3'端，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一类酶。主要活性及作用：催化DNA合成，具有5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活...
作为RT-qPCR过程中的关键原料之一,逆转录酶需要具备更快的逆转录速度、更高的合成产量以及更好的耐热性能。为了获得更适用于RT-qPCR的逆转录酶,翌圣生物在M-MLV的基础上通过基因改造,开发出RNase H活性更低,热稳定性更高,持续合成能力更强的Hifair®系列逆转录酶。 图2.逆转录酶作用原理图 翌圣Hifair®系列逆...
图5. 以300ng 293T细胞的总RNA为模板, 使用Hifair®Ⅲ逆转录酶预混液 (Cat NO.11141ES)、T品牌合成cDNA。取1μL cDNA为模板, 使用Hieff UNICON®Power qPCR预混液(Cat NO.11195ES)扩增20个不同GC含量(25-65%)、不同表达丰度的基因。 ◎线性检测范围广,Total RNA 10pg-5μg 图6.以10pg-5μg的2...
RT-qPCR以RNA为起始材料,在RT阶段,运用逆转录酶以RNA为模板形成互补的DNA链(cDNA)。随后以cDNA为模板进行qPCR反应。RT-qPCR已被用于多种分子生物学的应用中,其中包括病原体检测、基因测试、疾病研究和基因表达分析。 1.RT-qPCR的一步法与两步法 1)一步法:将逆转录与PCR扩增结合在一起,使逆转录酶与DNA聚合酶...
反转录酶(Reverse transcriptase)又称逆转录酶。是以RNA为模板指导dNTP合成互补DNA(cDNA)的酶。一部分反转录酶具有RNA酶活性,能够在转录后降解RNA-DNA杂交链中的RNA链。如果反转录酶没有Rnase酶活性,可加入RNaseH来获得更高的qPCR效率。常用的酶包括Money鼠白血病病毒(MML...
RT-qPCR是一种对特定DNA进行定量分析的方法，其原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行荧光定量PCR，在PCR扩增过程中，通过收集荧光信号，对PCR进程进行实时检测。在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性...
RT-PCR:反转录PCR(Reverse T ranscription - PCR , RT - PCR),将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增相结合,是PCR的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中首先经反转录酶将一条单链RNA逆转录成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。 RT-qPCR:实时荧光定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR, ...
在一步法RT-qPCR中,目标序列在同一反应孔或容器中进行逆转录和qPCR扩增。用随机引物或oligo(dT)引物代替目标特异性引物。一步法RT-qPCR相对于两步法RT-qPCR需要的样本更少。此外,任何技术重复之间的方差都可以用来评估这两个酶促步骤的联合可变性。一步法RT- qPCR经常被用于RNA的定量和质量控制。一步法可能的...
3、Super RNaseH- Reverse Transcriptase：MMLV反转录酶的RNase H-突变体，它能将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的模板合成较长的cDNA，最适42℃。（商品名为SuperScript和SuperScriptⅡ）4、GoScript Reverse Transcriptase：专为 qPCR 而设计，利用 M-MLV 和先进的缓冲液...