实时荧光定量PCR，也叫Real-Time PCR，即二代PCR，是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团，在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化，最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法：SYBR Green法和TaqMan探针法。① 荧光染料法（SYBR Green）：SYBR G...
3 实时荧光定量 PCR (qPCR)实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 是 DNA 的实时 PCR 扩增，通过荧光探针测量，最常见的是插入染料或基于水解的探针，从而实现 PCR 产物的定量 (见图 2)。该技术常用于检测病原体的存在和确定感兴趣的 DNA 序列的拷贝数。图 2. qPCR 流程图[11]。同样要经过...
实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR)是qPCR和RT-PCR的组合,所以RT-qPCR(也有人写成qRT-PCR)是结合了荧光定量技术的反转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析(RT-PCR只可以定性,但不能进行定量分析)。 (DOI: 10.1063/5.0021270) 总的...
RT-PCR与刚才介绍的PCR技术的主要区别在于它是从mRNA而不是双链DNA开始的。先利用反向引物在反转录酶催化下将mRNA反转录成单链DNA；DNA-RNA杂交链变性后，再用正向引物将单链DNA转换成双链DNA；接着在DNA聚合酶催化下，正向引物起始cDNA第二链合成，将单链DNA转换成双链DNA；最后用常规PCR技术扩增足量的cDNA用于...
qPCR 是一种实时检测PCR过程中荧光信号变化的技术，可以定量检测目标分子的含量。通过在反应体系中加入荧光探针或荧光染料实时监测荧光信号的变化，从而计算出目标分子的拷贝数。qPCR技术主要用于DNA或cDNA的定量分析，如基因表达分析、病毒载量检测等。RT-PCR 是一种把RNA分子转录为cDNA后，在体外进行DNA扩增的技术。RT...
RT-PCR:RNA相关分析,如基因表达研究(检测mRNA);RNA病毒检测,如COVID-19、流感病毒;反转录病毒研究,如HIV。 qPCR:病原体DNA检测,如检测DNA病毒和细菌的载量;基因拷贝数分析,如检测基因扩增或缺失;微生物定量,如环境样本中特定微生物的绝对定量。 RT-qPCR:分析mRNA表达水平;RNA病毒检测,如诊断RNA病毒感染并实时监...
● qPCR(Quantitative PCR)：是指定量实时PCR，即实时对DNA进行PCR扩增，通过荧光探针（最常见的是插层染料或水解探针）进行测量，从而对PCR产物进行定量。用于检测病原体的存在，并确定相关DNA序列的拷贝数。SYBR Green I是最常用的DNA结合荧光染料，当与双链DNA结合时会发出荧光，荧光强度与PCR产物的浓度成正比增长...
RT-PCR:逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)是一种把RNA分子转录为cDNA后,在体外进行DNA扩增的技术。RT-PCR技术结合了反转录和PCR两个步骤,主要用于RNA分子的扩增和检测,如基因转录水平分析、miRNA表达研究等。 RT-qPCR:逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)是一种结合了逆转录PCR和实时定量PCR的技术,可以对RNA分子...
RT-PCR，即 逆转录PCR，也被称为反转录-PCR，是聚合酶链式反应（PCR）的一种重要变形，被广泛应用于分子生物学领域。在RT-PCR的过程中，RNA链被逆转录成与其互补的DNA链，随后以这条DNA链为模板，通过PCR技术进行DNA的扩增。这一技术为研究 基因表达、基因突变等提供了有力的工具。【 qPCR与Real-time-...