RT-PCR引物的选择 逆转录引物一般包含3种:oligo dT引物,随机引物和特异性引物。对于短的且不具备发卡结构的真核细胞mRNA,三种都可用。 RT-PCR引物设计原则 1. 上下游引物要保守:扩增子长度需选择一段保守片段(100-200 bp)进行PCR扩增,选择片段需跨越内含子,因内含子...
-, 视频播放量 126、弹幕量 0、点赞数 5、投硬币枚数 0、收藏人数 11、转发人数 1, 视频作者 生物潘多分, 作者简介 浙江生物潘老师 vx: zjsw100p ,相关视频:一题帮你搞懂反向PCR。2025年1月浙江首考生物真题基因工程大题最难的一空,关于反向PCR如何选择引物,你搞懂了吗
总之，选择合适的RT-PCR引物取决于实验的特定需求，包括RNA类型、目标序列的已知程度以及对样品质量的控制。随机引物和基因特异性引物各有适用场景，而Oligo dT引物对于PolyA尾巴RNA的处理需要特别注意样品质量。在实验设计时，应根据实际情况来决定最适宜的引物类型。
在进行RT-PCR合成cDNA的过程中，引物的选择至关重要。首先，对于难以完全拷贝的特定mRNA，可以使用随机六聚体引物。这种非特异性引物让体系中的所有RNA分子都参与cDNA的第一链合成，PCR扩增过程中会赋予所需的特异性。然而，值得注意的是，通常采用随机六聚体合成的cDNA中，约有96%来自rRNA。相比之下，O...
理想情况下，引物的GC含量应保持在40%至60%之间，以确保其在PCR过程中的稳定性和特异性。此外，引物的特异性也是不容忽视的一点。在选择引物时，我们应确保其与目标序列完全匹配，避免与非目标序列产生交叉反应。这要求我们对目标序列进行仔细分析，并设计具有高度特异性的引物。最后，我们还需要考虑引物的溶解度和纯度...
随机引物 适用于长的或具有发卡结构的 RNA。适用于 rRNA、mRNA、tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。 Oligo dT 适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA。(原核生物的 RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具PolyA 尾巴。)由于 Oligo dT 要结合到 Po...
答案解析 查看更多优质解析 解答一 举报 因为RT-PCR的模版是单链的RNA,一种引物就够了,而常规PCR的引物是双链DNA,需要上下游引物从两端同时扩增. 解析看不懂?免费查看同类题视频解析查看解答 更多答案(1) 相似问题 RT-PCR实验中为什么只出现一条引物的带 怎样设计RT PCR引物 RT-PCR与时时PCR的原理及引物有什...
过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,理论上至少需要2^(n-1)个引物B。 故答案为:2^(n-1)。 4. 【答案】 能;增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量(或浓度),便于检测 【解析】 利用RT-PCR技术获取的目的基因能在物种之间交流;该技术还可用于对某些微量RNA病毒的检测,可提高检测的灵敏度,原因是增加了待...
通常RT primer可分为三类:oligo dT,随机引物和基因特异性引物。根据不同的实验需求选择适合的引物进行使用。 1、如果模板为真核生物来源,且后期cDNA用于常规PCR扩增,建议选择Oligo(dT);若后续实验仅用于qPCR,建议将Oligo(dT)与随机引物混合后使用,可提高反转录效率。