RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量。检测基因表达的方法，参见Northern Blot法。RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒...
定义:RT-PCR是逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription PCR),一种将RNA转录为cDNA后在体外进行DNA扩增的技术。RT-PCR技术结合了反转录和PCR两个步骤。 应用:RT-PCR主要用于RNA分子的扩增和检测 04 RT-qPCR 定义:RT-qPCR是逆转录实时...
RT-PCR:特指反转录PCR (Reverse Transcription-PCR),即以RNA为模板反转录成cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增。 qPCR:指实时荧光定量PCR(quantitative Real time-PCR ),即PCR过程中每个循环都有数据的实时记录,因此可以对起始模板数量进行精确的分析。 Real time PCR:一般缩写为 qPCR,与qPCR定义相同。 RT-qPCR/ Rea...
定义：别名是尿嘧啶-DNA糖基化酶/尿嘧啶-DNA糖基化酶（热敏），也称为UDG酶/HL-UDG酶。HL-UDG酶与普通UDG酶相比，避免了常规UDG酶灭活后可能存在的残留活性在常温下对含dU扩增产物的降解作用。HL-UDG酶在室温下起作用，且对温度敏感、易于灭活。作用：高效控制PCR残余污染。在IVD领域中应用：在临床检验的PCR...
1． 随机六聚体引物：当特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的cDNA中96%来源于rRNA。2． Oligo(dT)：是一...
1.普通 PCR 2.实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR, qPCR）3.数字PCR（Digital PCR, Dig-...
PCR（聚合酶链反应）定义：是一种用于在体外扩增特定DNA片段的技术。过程：包括变性（将双链DNA解链为单链）、退火（引物与模板DNA结合）和延伸（DNA聚合酶沿着引物合成新链）三个步骤。应用：用于DNA的克隆、突变分析、基因表达分析等。qPCR（定量PCR）定义：是PCR的一种，用于定量分析样品中的DNA或RNA含量。过程...
RT-PCR实例: 1、实验材料:拟南芥野生型Ws及突变体m1、m2花序 2、实验目的:分析m1、m2与野生型花序中G1基因的表达的差异 3、实验步骤:设计ACTIN及G1基因的引物;分别抽取野生型Ws及突变体m1、m2花序RNA,DNase I处理,以尽量去除基因组DNA;电泳检测,估计RNA总量;取1ug左右的RNA进行反转录; 取反转录好的cDNA总量...