2. 原理 HPLC RP法基于样品溶液中化合物的亲水性和疏水性之间的相互作用进行分离。在RP柱中,固定相通常是一种疏水性的材料,如C18矽胶。样品中的化合物会与固定相发生相互作用,疏水性的化合物与固定相相互作用较强,因此在柱中停留时间较长;而亲水性的化合物与固定相相互作用较弱,因此在柱中停留时间较短。通过调...
一、RP-HPLC的原理 RP-HPLC通过使用疏水固定相和溶剂系统控制溶解度差异实现物质的分离。在RP-HPLC中,疏水固定相通常是含有C18链或者其他疏水性功能团的硅胶或化学键合硅胶,而样品则是通过疏水作用与固定相发生相互作用。当样品溶解度与固定相相比较大时,样品将与固定相更多地发生作用,分离效果更好。因此,RP-HPLC常...
在RP-HPLC中,有机相的类型经常可以影响选择性,而在添加离液剂的RP-HPLC中,有机相如甲醇、乙腈的影响甚至更加明显。如前面分析离液剂的机理提到,离液剂会吸附在固定相的表面,从而形成“准固定相(pseudo-stationary phase)”,从而让固定相带有了电荷,可以与带正电荷的分析物发生电荷作用。因此,离液剂在固定相上的吸附...
反相高效液相色谱法（RP-HPLC）使用亲水性的固定相和疏水性的移动相，利用样品分子在移动相和固定相之间的互作用力差异进行分离。一、基本原理：1.疏水性固定相：反相色谱柱通常使用疏水性的固定相材料，如疏水链状碳氢化合物改性的硅胶或封闭的C18链，使分析物在移动相中具有亲水性，与固定相表面发生疏水作...
重组人表皮生长因子(简称rhEGF),是由53个氨基酸组成的相对分子量约为6000道尔顿的小分子多肽。重组人表皮生长因子凝胶是用于治疗皮肤烧烫伤的外用药物,其主要成分为rhEGF,可促进动物皮肤创面组织修复过程中的DNA、RNA和羟脯氨酸的合成,加速创面肉芽组织的生成...
一、原理 HPLC RP法是基于样品与固定相之间的亲疏水性相互作用来进行物质分离的。常用的固定相是疏水性的烷基链,如C18。当样品溶液通过固定相时,极性物质会与固定相表面发生亲和作用,从而被滞留,而非极性物质则会较快地通过。通过调节流动相的成分和流速,可以实现对不同化合物的分离。 二、操作步骤 1. 样品制备...
RP-HPLC的原理是利用固定相为亲水性的填充柱，称为反相色谱柱。样品中的非极性或弱极性化合物会与反相柱上的亲水性固定相发生吸附，从而实现样品中化合物的分离。一般使用的反相填充固定相有C18、C8和C4等。RP-HPLC的仪器配置主要包括溶液调制系统、进样器、色谱柱、检测器和数据处理系统等。溶液调制系统负责溶解和...
RP-HPLC反相高效液相色谱法及应用发布日期:2019-04-27 反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatogra)是由非极性固定相和极性流动相组成的液相色谱系统,与由极性固定相和弱极性流动相组成的液相色谱系统相反。反相色谱的固定相为十八烷基键合硅胶,流动相为甲醇和乙腈。反相高效液相色谱(正相色谱...
- 有机含氮类药物多呈碱性,RP-HPLC所用的硅胶基质色谱柱表面残留的硅醇基(-SiOH)易与碱性药物的氨基发生次级相互作用(如离子交换或氢键作用),导致色谱峰拖尾。 - 流动相pH未达到化合物最佳离解状态(通常需高于药物pKa 2个单位以上),未质子化的氨基更易与硅醇基作用。 - 色谱柱老化或未封尾,硅醇基暴露增...
1.3.4测定原理和公式 在一定条件下测定时,测定信号与待测组分的量呈正比,因此有: ms+mA=kXhx (1) ms+ms=k'Xhs (2) 在完全相同的条件下测定时,比例常数4相同, 式(1)除以式(2)有: ms+mA = hA ms+mB hB 即: ms+p^VA _ Aa ms+pX-VB hB ...