1. 化学发光法化学发光法是一种常用的检测ROS的方法。该方法利用ROS与特定的化学发光剂反应,产生光信号。由于ROS与化学发光剂的反应是瞬时的,因此该方法可以快速检测ROS的产生。常用的化学发光剂包括三羟甲基氨基甲烷、荧光素和Lucigenin等。2. 电子自旋共振(ESR)电子自旋共振是一种检测ROS的方法,特别是对于超氧...
三、电子顺磁共振法电子顺磁共振法(Electron Paramagnetic Resonance,EPR)是一种基于活性氧的自旋共振信号进行检测的方法。该方法利用活性氧的自旋共振特性,通过外加磁场和微波辐射,使活性氧的自旋共振信号被放大并检测。该方法具有高度的特异性和灵敏度,可以用于直接检测生物体内的活性氧。在活性氧检测中,常用的EPR...
分光光度法分光光度法是最早被用于ROS检测的方法之一。它基于自由基与氧化还原物质之间的反应,通过测量反应底物和产物在不同波长下的吸光度差来半定量地检测ROS。其中,细胞色素C还原法和氮蓝四唑还原法是最常用的方法。基于荧光蛋白的ROS检测方法通过基因工程技术,将荧光蛋白与原核氧化还原敏感蛋白重组,形成荧光蛋白...
(可选)阳性对照:先用无血清培养基稀释阳性对照(如abs580232,Rosup,100mM)至常用工作浓度100μM,然后加入细胞中,在37℃下避光孵育30分钟至4小时,以提升活性氧水平。不同细胞类型所需孵育时间可能有所不同,例如HeLa细胞需孵育30-60分钟,而MRC5人胚胎成纤维细胞则需90分钟。ROS探针准备:在装载探针前,...
特定 ROS 检测方法 对于超氧阴离子自由基(O2•-)的检测,我们可以使用HKSOX-1,HKSOX-1r,HKSOX-1m等试剂。O2•-,这种在细胞信号传导中扮演重要角色的活性氧分子,不仅参与先天免疫和代谢稳态的调控,还与多种生理和病理过程紧密相关。其异常水平的产生可能导致铁硫(Fe-S)蛋白和半胱氨酸硫醇等关键生物...
ROS活性氧有哪些检测方法? ROS在细胞生命,应激和死亡中具介导作用,并且不同浓度的ROS在其中起着截然不同的作用,从而导致细胞命运的不同。因此,非常有必要对ROS的浓度或相对水平进行可靠的测量下面是ROS几种测试方法以及原理。 1、电子顺磁共振技术( electron paramagnetic resonance , EPR ) ...
常用的检测方法有酶联免疫吸附(ELISA)法,仅供参考。ELISA采用的是经典的双抗体夹心法,可以测定植物活性氧(ROS)的水平。用纯化的植物ROS捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入ROS,再加入HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化...
2)对于刺激时间较长的细胞,先用活性氧阳性对照(Rosup)或自己感兴趣的药物刺激细胞,后装载探针。1.1原位装载探针(本方法仅适用于贴壁细胞)1)细胞准备:检测前一天进行细胞铺板,确保检测时细胞密度达到50~70%。2)诱导:去除细胞培养液,加入适量经合适的缓冲液或无血清培养基稀释到工作浓度的药物,于37℃...
表1. 检测/定量活性氧的方法 (不同环境)[5]。 ▐特定 ROS 检测方法 ROS:O2•- 检测试剂:HKSOX-1,HKSOX-1r,HKSOX-1m 超氧阴离子自由基(O2•-)一直被认为是一种重要的细胞信号分子,参与先天免疫和代谢稳态等多种生理和病理过程。O2•-的异常产生可导致铁硫(Fe-S)蛋白和半胱氨酸硫醇等生物分子的...
活性氧含量检测试剂盒通过使用特异性探针或底物与ROS发生化学反应,从而实现对ROS含量的测定。这种检测方法基于探针或底物与ROS的特异性反应,通常使用荧光分光光度计或流式细胞术进行测量。活性氧含量检测试剂盒具有以下几个优势: 1. 高选择性:活性氧含量检测试剂盒能够特异性地检测ROS,避免了其他化学物质的干扰,确保测...