Real-time PCR，即实时荧光定量PCR（qPCR），是一种强大的分子技术，能够在实时状态下监测和测量DNA的扩增。该技术通过对传统PCR的改进，实现了对特定DNA序列的高精度、高灵敏度和快速检测与定量。Real-time PCR的核心特征实时监测 Real-time PCR在每次扩增循环后测量PCR产物的积累，从而能够在反应的对数增长阶段进行...
Real Time PCR,即实时荧光定量PCR,也被称为定量PCR或qPCR,是实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法。 由于定量PCR具有操作简单、快速方便、灵敏度高、重复性好、污染率低等优点,被广泛应用于医学检测、药物疗效考核、基因表达研究、转基因研究、基因检测、病原体检测、动植物检测、食品检测等各种领域。 所以,无论您从...
检验检测 生物信息学实时荧光定量PCR(realtime PCR)一、 样品RNA的抽提 1. 取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。 2. 两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下...
★实时荧光定量PCR检测技术 （Real-timePCR)荧光定量PCR（Realtimefluores-cencequantitativePCR,RTFQPCR)是1996年由美国AppliedBiosystems公司推出的一种新定量实验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的...
病毒检测：RT-PCR是许多病毒检测的主要方法，包括COVID-19、流感病毒、HIV等。它可以快速、准确地检测病毒的存在，并用于临床诊断和流行病学研究。微生物学研究：RT-PCR可用于检测和定量微生物的存在，例如细菌、真菌和寄生虫等。这对于了解微生物的种类和数量在感染和疾病中的作用至关重要。癌症诊断：RT-PCR在癌症...
以下是real-time PCR的简易操作流程: 1. 样品准备 - 从实验对象中收集所需的组织样品或细胞样品。 - 样本的处理和提取要遵循标准的生物安全操作规程,确保样品的纯度和完整性。 2. DNA/RNA提取 - 根据实验需求选择合适的DNA/RNA提取试剂盒和方法,从样品中提取目标DNA或RNA。 - 保证提取的DNA/RNA质量和浓度满足...
通过PCR反应生成双链DNA,SYBR®Green I与双链DNA结合发出荧光,通过检测荧光不但可以检测反应体系中的DNA扩增量,同时还能测定扩增产物的DNA融解温度。具体原理见下图。 嵌合荧光染料法原理图 ■双标记荧光探针法 双标记荧光探针法是使用5’端带有荧光物质(如:FAM等),3’端带有淬灭物质(如:TAMRA等)的双标记荧光探针...
结果分析使用双标准曲线法进行相对定量。 实验报告内容包括: RNA抽提:(Trizol RNA抽提及质量检测方法) cDNA合成:(cDNA合成方法) 实时定量PCR: ★实时定量PCR方法——介绍实时定量PCR反应的详细过程 ★实时定量PCR使用引物的列表 ★梯度稀释的标准品及3个待测样品的待测基因实时定量PCR结果 ★梯度稀释的标准品及3个...
Real-time PCR有多种应用,其中包括基因表达研究。通过实时监测特定基因的表达水平,我们可以了解基因在不同条件下的转录变化情况,从而理解其在生物过程中的功能和调控机制。此外,Real-time PCR还可以用于微生物检测。通过设计特异性的引物,可以快速、精确地检测病原微生物的存在与否,为临床诊断和疾病防控提供帮助。 除了...