在进行qRT-PCR实验之前,确保实验环境无酶是非常重要的。首先,用核酸清洁剂彻底擦拭移液枪和台面,以确保所有试剂和耗材的处理都是干净的。一、细胞中RNA提取 🧬 裂解细胞:每5-10x106个细胞加入1mL Trizol,放在冰盒上,用Trizol破坏细胞并释放RNA。 萃取混合物:按氯仿:Trizol=1:5的比例加入氯仿(0.2ml),剧烈振荡...
📚 想要掌握qRT-PCR实验技巧?这里有一份详尽的实验手册等你来拿!🔍 实验步骤概览:从RNA提取到qPCR分析,每一步都有详细指导。🔍 常见问题及解决方案:遇到难题?这里有解决方法帮你轻松搞定!🔍 RNA质量评价:如何判断RNA浓度和纯度?这里有实用技巧。🔍 内参基因与目的基因Ct值异常?别担心,这里有解决方案。🔍...
🔬实验步骤: 样本采集与处理:确保RNA的完整性。 RNA提取:严格按照试剂盒操作。 反转录:合成cDNA。 配置qRT-PCR反应体系:加入引物等。 扩增反应:设置合适的程序,上机进行扩增。📊数据分析: 软件选择:使用合适的软件(如Bio-Rad CFX Manager等)。 Ct值分析:通过相对定量(如2⁻ΔΔCt法)计算基因表达差异。📚...
师姐,想请教一下,做PCR实验时需要完全避光吗? 1周前·山东 1 分享 回复 求求求求了_ ... 想问一下师姐用的是什么牌子的提RNA试剂盒呀[舔屏] 5天前·广西 0 分享 回复 Expection ... [听歌]提的rna不需要跑电泳看看条带吗,我的提出来测rna浓度也不错,但是跑条带就不行,不是降解就是DNA污染 ...
实验室大师兄的经验是每次反转得到的 20 ul 体系的 cDNA 直接稀释 20X,而博后师姐是按照 10X 稀释,我一般是看情况而定。因为每个人提的 RNA 质量不同,反转的水平也分高低,再说反转的技术也未必稳定。 所以在每次拿到反转的 cDNA 后,我首先会稀释 3 倍左右,然后利用管家基因做一次 RT-PCR,循环数一般为 25 ...
实验室大师兄的经验是每次反转得到的 20 ul 体系的 cDNA 直接稀释 20X,而博后师姐是按照 10X 稀释,我一般是看情况而定。因为每个人提的 RNA 质量不同,反转的水平也分高低,再说反转的技术也未必稳定。 所以在每次拿到反转的 cDNA 后,我首先会稀释 3 倍左右,然后利用管家基因做一次 RT-PCR,循环数一般为 25 ...
在qRT-PCR实验中，Ct值表示每个反应管内的荧光信号达到预设阈值的周期数（cycle）。扩增曲线及溶解曲线如下图所示：扩增曲线主要用于评估扩增引物的效率。当使用引物特异性较好时，扩增曲线呈现出单一峰值，这样的实验结果更加可靠。一、Livak法的详细步骤：在这里，我们有一个对照组（wt），一个处理组（mut），还有一...
qRT- PCR实验protocl文字版。八一喊你来学习啦!文字版出炉啦～引物设计超详细流程+体系配制模版+数据处理模版+超详细protocol请大家自取～ #实验室日常 #pcr #实验教学 #研究生 #生物读研 - 八一今天做实验了吗于20241001发布在抖音,已经收获了417个喜欢,来抖音,记录美
qRT-PCR实验原理 RT-qPCR由普通PCR技术发展而来,它是在传统PCR反应体系中加入荧光化学物质(荧光染料或者荧光探针),根据各自不同的发光机制实时检测PCR退火、延伸过程中荧光信号变化来计算PCR每个循环中产物的变化量,目前最常见的方法为荧光染料法和探针法。
〖科研笔记〗q-PCR实验步骤。“四大步”,走完qRT-PCR完整实验流程! #qpcr #科研 #生物 #知识科普 #科研学习 - 华睿康生物试剂于20240814发布在抖音,已经收获了40个喜欢,来抖音,记录美好生活!