(1)灭菌双蒸水 (2)DNA:双酶切后的基因片段及线性质粒 (3)T4DNA 连接酶:350U/μL (4)10 连接酶缓冲液:660mmol/L Tris-HCl(pH7.6) 66 mmol/L MgCl2 100 mmol/L DTT 1 mmol/L ATP 2、方法 (1)5mL 离心管中加入以下成分: ddH2O X-DNA pET28a-DNA 10 Buffer T4 ligase (2)14-16℃水浴中...
③通过DNA连接酶将EGFP基因插入到pET28a质粒中,构建原核表达载体pET28aEGFP。 (2)转化与筛选 ①将构建好的原核表达载体pET28aEGFP转化到大肠杆菌DH5α中,涂布在含有Amp的SOC培养基上筛选阳性克隆。 ②通过蓝白筛选法验证阳性克隆是否正确载入pET28aEGFP。
pET-28a(+)质粒载体说明书-pet-28a. 1、增加收菌次数,相对提高了质粒的量5261,这样的话裂解液的量可以适当增加。 2、裂解要充分,变性和复性按说明应该是不超过5分钟,合理控制时间,一般在3分到4分半的时4102间都是可以的。 3、过柱子时,吸附的时间尽量长一些,可以在这期间做做其他实验或者吃个饭什么的。
其实，在我的眼里，载体是这样的：比如，pET-28a(+)首先它是大肠表达载体，大小为5369 bp，胞内表达目的基因 然后，我们对其元件进行一个个的分析：复制子：ColE1/pMB1/pBR322/pUC ori——起始载体的复制；f1 ori——f1噬菌体复制子，显示正义链合成方向KanR：编码氨基糖苷磷酸转移酶，在原核细胞中产生卡那霉素...
原核表达载体 pET28a 2EGFP 原核表达载体 pET28a 2EGFP的构建与表达季爱加 , 宁喜斌 3 (上海海洋大学 食品学院 ,上海 201306 ) 摘 要 以质粒 PEGFP2N3中增强型绿色荧光蛋白 ( Enhanced Green F luo re scen t P ro te in, EGFP)基因片段为模板 ,利用 PCR 技术扩增得到 EGFP基因片段 ,并设计引物在其 ...
・论著・pET28aPTDAg85B质粒构建及原核表达条件的优化杜昭弘 王婉 戴京京 何江 王文洋 杨小康 邢应如 尤其 穆敏胡东 吴静 张荣波【摘要】 目的 构建pET28aPTDAg85B原核表达载体,并对其在E.coliBL21(DE3)中表达条件进行优化。方法 将TATPTD序列插入到用限制性内切酶NheI和BamHI双酶切的pET28a质粒中,获得pET28a...
pET-28a(+) 质粒说明书 产品信息：货号名称产品形式规格储存VT0331-01 pET-28a(+) Plasmid 液体质粒20μl-20℃ 使用说明：淼灵质粒平台的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证，如存在质量问题，请在收到产品三个月内通知我司，收到质粒后请短暂离心，取1μl转化至对应感受态中，挑取单克隆重新提取质粒后...
内容提示: 原核表达载体 pET28a2EGFP 的构建与表达季爱加, 宁喜斌*( 上海海洋大学 食品学院, 上海 201306)摘 要 以质粒 PEGFP2N3 中增强型绿色荧光蛋白( Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP) 基因片 段为模板, 利用 PCR 技术扩增得到 EGFP 基因片 段, 并设计引 物在其 2 端引 入酶切位点 EcoRⅠ ...
pET28a-c(+)质粒图谱
pET28a-ECFP质粒是一种原核表达载体,C端含有一个6×His标签,N端含有一个thrombin位点、6×His标签、T7标签和 ECFP标签。该质粒含有多个常用的酶切位点,便于外源基因克隆。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导,目的基因 被克隆到质粒载体上,受噬菌体强转录及翻译信号控制。