RFLP操作过程: (1)提取样本的Total DNA (2)酶切 (3)电泳---胶处理 (4)转膜 (5)杂交 (6)放射自显影 (7)结果分析SSCP基本过程: ①PCR扩增靶DNA; ②将特异的PCR扩增产物变性,而后快速复性,使之成为具有一定空间结构的单链DNA分子; ③将适量的单链DNA进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳; ④最后通过放射性自显...
PCR-RFLP实验步骤主要包括哪些? 参考答案: 基因DNA提取、设计引物、选择内切酶、扩增目的基因、内切酶消化PCR产物以及电泳后分析等。您可能感兴趣的试卷你可能感兴趣的试题 1.问答题简述MLPA的特点 参考答案: 1.灵敏度高 2.特异性和重现性高 3.检测分辨率宽。 4.方法简便(快速检测非整倍体异常) 2.问答题简述...
1.熟悉PCR—RFLP分析技术原理及实验步骤。 2.掌握琼脂糖凝胶电泳检测方法。 3.了解PCR— RFLP在遗传病基因诊断中的作用。 【实验原理】 聚合酶链式反应(PCR)是模拟体内DNA复制条件在体外酶促合成特异DNA片段的循环反应,可使目的DNA片段得以迅速扩增。其主要步骤是:将待扩增的模板DNA置于高温(约93℃-95℃)下使之...
鸡基因组的PCR-RFLP分析 一、实验方法 1、鸡基因组DNA的提取 2、目的基因的PCR扩增 3、内切酶消化PCR产物 4、琼脂糖凝胶电泳(检测基因型) 鸡DNA的获取 1、鸡翅下静脉采集全血;2%EDTA抗凝; 2、DNA提取: 裂解细胞核(红细胞+白细胞) ↓酚-氯仿去除蛋白质 一、实验方法 1、鸡基因组DNA的提取 2、目的基因的PCR...
PCR-RFLP方法有以下优点:(1)PCR-RFLP方法远较PCR-SSO方法(指一般的PCR-SSO方法,而不是PCR-反相SSO方法)简单和实用,因为PCR-RFLP不需要制备和标记众多的SSO探针;(2)在鉴定单个碱基差异方面,PCR-RFLP方法可能比PCR-SSO方法更为简便和准确,因为PCR-RFLP方法无须繁琐地调整杂交和洗膜的条件;(3)PCR-RFLP显示二个...
【仪器与试剂】一、实验仪器1、琼脂糖凝胶电泳系统2、紫外观察分析仪3、离心机4、单面刀片5、恒温水浴锅 二、试剂 1、DNA回收试剂盒2、50×TAE3、ddH2O 三、实验步骤 1）在紫外灯下切分含DNA的琼脂糖块，尽可能除去多余的琼脂糖．放入1.5ml离心管中。2）按每100mg琼脂糖加入...
二、实验原理 第一代分子遗传标记RFLP是根据不同品种(个体)基因组的限制性内切酶的酶切位点碱基发生突变,或酶切位点之间发生了碱基的插入、缺失、重排等,导致酶切片段大小发生了变化,这种变化可以通过PCR,酶切及琼脂糖凝胶电泳进行检测,从而可比较不同品种(个体)的DNA水平的差异(即多态性),RFLP已被广泛用于基因组...
5) 突变的分析；(6) 染色体步移；(7) RAPD、AFLP、RFLP等DNA多态性分析等。工具/原料 DNA模版 对应目的基因的特异引物 10×PCR Buffer 2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM Taq酶 操作步骤 1 在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix ...
PCR-RFLP检测NQO1C609T多态性(一)掌握盐析法快速DNA抽提法的原理。(二)掌握PCR-RFLP分型SNP的原理。(三)熟悉盐析法快速DNA抽提法的操作技术。(四)了解单核苷酸多态性的常用分型方法。【学习目的要求】【实验教学内容】(一)实验原理(二)实验操作是指群体基因组DNA特定的核苷酸位置上,不同个体之间存在2种或2种以...
实验步骤 尽管基于 Southern 的 RFLP 检测是一种很有效的、近乎艺术级的确定生物学关系的手段,但 PCR 技术在常规的父子关系的检测中越来越常用。商业化的用于多态区间扩增的试剂盒包含了使用生产商预制的酶溶液、各种缓冲液和引物的方案,以及它们对 DNA 浓度、时间和 PCR 扩增循环次数的建议;然而需要特别指出的是不...