PCR-RFLP是将聚合酶链反应与RFLP方法结合的一种检测技术。由于DNA序列的差异,造成了内切酶位点的变化,或是新的酶切位点的产生;或是原酶切位点的消失等,通过酶切后电泳图谱的判断,达到确定检测结果。该方法包括1PCR。即利用一对或数对特异性引物,将目标DNA扩增;2酶切。即利用某些限制性内切酶消化PCR产物,如PCR产...
pcr-rflp原理 PCR-RFLP即聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术,是结合了PCR技术与RFLP技术的一种分子生物学方法,原理如下: 1. PCR扩增: 设计引物:根据目的基因两端的序列,设计一对特异性的引物。这对引物能够与模板DNA上特定的目标区域结合,决定了后续扩增的DNA片段的起始和终止位置。 扩增目标DNA:以含有目标...
⑤ 完全酶解是 PCR-RFLP 中的重要一步,若酶切不完全,虽对常见基因型的判断影响不大,但对稀有变异的个体会造成误检或漏检,并增加结果判定的难度,失去 RFLP 方法的优势。因此在酶解过程中,不同的酶解时间对于结果的判定会产生影响。一般情况下 37 ℃ 2~3 h 就可...
限制性内切酶MstⅡ切割的序列是CCTGAGG(其中N是任何一种核苷酸),切割正常DNA产生1.15+0.20 kb β珠蛋白的DNA片段;若切割患者DNA时,由于A→T破坏了MstⅡ的位点(CCTGTGG),便形成1.35kb β珠蛋白的DNA片段(图5-3)。利用以上原理,利用PCR-RFLP的技术进行诊断。 图5-3 PCR-RFLP诊断镰状细胞贫血原理图反馈 收藏 ...
对扩增片段进行限制性酶切片段长度多态性( restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析,是常用的基因检测方法,长片段PCR技术的发展增加了RFLP的应用范围及准确度,已应用于检测mRNA分子的突变、 七、小结自从1994年建立长片段PCR技术以来,此方法在不断发展完善中日渐成熟,形成了一套完整的技术体系。有很多公司都...
PCR-RFLP（聚合酶链反应-限制性片段长度多态性）技术的核心在于它的操作流程。首先，通过PCR步骤，目标DNA被高效扩增，其目的在于增加待检测DNA片段的浓度，以确保后续步骤的准确性。PCR产物随后接受特异性内切酶的处理，这种酶能够识别并切割DNA分子在特定的限制性酶切位点，导致DNA片段被切成不同长度的片段...
PCR-RFLP的基本原理是用PCR扩增目的DNA，扩增产物再用特异性内切酶消化切割成不同大小片段，直接在凝胶电泳上分辨。不同等位基因的限制性酶切位点分布不同，产生不同长度的DNA片段条带。此项技术大大提高了目的DNA的含量和相对特异性，而且方法简便，分型时间短。
PCR-RFLP主要用于核酸变异性分析与比较。 (2)PCR-SSCP技术:是聚合酶链反应一单链构象多态性分析(single strand conformation polymorphism)的简称,原理是将经扩增的DNA片段经过变性处理,形成单链,由于序列不同,单链构象就有差异在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率不同,通过与标准物的对比,即可检测出有无突变,该技术...
PCR-RFLP.是采用特定的限制性内切酶对PCR产物进行处理,对酶切后的片段长 度进行多态性分析,用以判断在酶切位点是否存在点突变的一种方法。 PCR-ASO,是用寡核苷酸探针与PCR产物杂交以检测点突变的技术。 PCR-SSCP:是根据单链DNA分子能自发地形成二级结构,且二级结构的空间构象 取决于DNA分子本身的碱基组成。 变性...