2 常规 PCRPCR 的基本成分包括模板 DNA、引物、反应缓冲液、游离核苷酸、聚合酶、盐和水 (不含核酸酶和污染 DNA) 等。只要目标区域两侧的碱基序列 (寻找的特定 DNA 序列)是已知的，几乎任何 DNA 区域都可以作为 PCR 扩增的模板[10]。在典型的 PCR 分析中，通过重复简单的三步过程：变性、退火和延伸，目标区域...
1 各类 PCR ,分不清? 2 常规 PCR 3 实时荧光定量 PCR (qPCR) 基本步骤: 3.1 SYBR Green 3.2 TaqMans 探针 4 逆转录 PCR (RT-PCR) 基本步骤: 5 数字 PCR (dPCR) 基本步骤: 注意事项: 6 小结 询价与订购: 参考文献: PCR 作为分子生物学的超级工具,有着多种变体。今天,我们就来深入聊聊各类 PCR...
也可直接使用 RT-PCR Kit。 (2) 逆转录:设置逆转录程序。 (3) PCR 扩增:以合成的 cDNA 为模板进行 PCR 或 qPCR 实验。(RT-qPCR 分一步法 RT-qPCR 和两步法 RT-qPCR 两种)。 (4) 产物分析:通过琼脂糖凝胶电泳 (RT-PCR) 或荧光信号 (RT-qPCR) 分析扩增效果。 此外,一种将 RT-PCR 与 qPCR 相结...
实时荧光定量PCR,即Real-Time PCR,即第二代PCR,是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团,在整个PCR反应过程中通过收集荧光信号来实时监测每一个循环中扩增产物量的变化,最后通过CT值和标准曲线对待测检测样品进行定量分析。qPCR在聚合酶链反...
在典型的 PCR 分析中,通过重复简单的三步过程:变性、退火和延伸,目标区域即可完成扩增 (图 1)。 CR 反应流程图[10]。 基本步骤: (1) 准备反应体系:模板 DNA、引物 (正、反向)、dNTPs (dATP、dTTP、dCTP、dGTP)、PCR 反应缓冲液 (提供合适的 pH 和离子强度)、耐高温TaqDNA 聚合酶、去离子水等。也可直接...
实时荧光定量PCR(Real-time PCR,Quantitative Real-time PCR,qPCR),即第二代PCR技术,是指在整个扩增的过程中,引入了荧光染料或者荧光基团,随着DNA数量的成倍增加,反应体系中的荧光信号也会增强。 在整个PCR反应过程中,借助对荧光信号的强弱进行检测实时监测每一个循环中扩增产物量的变化,最后通过标准曲线和CT值对待...
在典型的 PCR 分析中,通过重复简单的三步过程:变性、退火和延伸,目标区域即可完成扩增 (图 1)。 图1. PCR 反应流程图[10]。 向上滑动阅览 基本步骤: (1) 准备反应体系:模板 DNA、引物 (正、反向)、dNTPs (dATP、dTTP、dCTP、dGTP)、PCR 反应缓冲液 (提供合适的 pH 和离子强度)、耐高温 Taq DNA 聚合酶...
普通PCR即第一代PCR技术,以双链DNA为模板,以dNTP为底物进行扩增,特异性地扩增双链DNA的过程,然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析。 PCR的过程大致可分为高温变性、低温退火、适温延伸三个基本反应步骤。 ① 高温变性:双链DNA模板经过高温(95℃左右)加热一定时间(10~30s)后,双螺旋的氢键断裂而变性解链变成...
PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在 DNA 聚合酶催化下,以母链 DNA 为模板,以特定引物为延伸起点,反应体系中加入 dNTP、Mg2+等原料,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板 DNA 互补的子链 DNA 的过程,可快速特异性地在体外扩增目的 DNA[1][2]。
实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)是 DNA 的实时 PCR 扩增,通过荧光探针测量,常见的是插入染料或基于水解的探针,从而实现 PCR 产物的定量(见图 2)。该技术常用于检测病原体的存在和确定感兴趣的 DNA 序列的拷贝数。 图2. qPCR 流程图[11]。