(1)融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。(2)细胞裂解对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分...
注意：裂解液中NP-40的最佳浓度的确定可能需要进行预实验。在此推荐0.5%的NP 40浓度对于裂解淋巴细胞效果很好。
NP-40裂解液 由于NP-40裂解液的性质较为温和,因此它常被用于需要保持蛋白质功能完整的实验,如Western blot、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(co-IP)、染色质免疫共沉淀(ChIP)和酶活力测定等。同时,由于其含有较高浓度的去垢剂,不能使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度,但可以使用其他方法,如BCA蛋白浓度...
NP-40 裂解液的主要成分为 50mM Tris(pH7.4),150mM NaCl,1% NP-40 以及 sodiumpyrophosphate,β-glycerophosphate,sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。 由于含有较高浓度的去垢剂,不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
1.融解NP-40裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。 2.对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150～250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解...
取适量NP-40裂解液,在使用前加入1%PMSF(PMSF的终浓度为1mM) 贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。 悬浮...
[产品名称]:NP-40裂解液-科研用试剂 [英文名称]: [类别]:蛋白提取 产地]:山东青岛,进口原装 [用途]:本品只能用于科研实验,严禁用于临床。 [规格/型号]:100ml/瓶。 [有效期]:十二个月 [产品浓度]: [贮存环境]:-20℃环境避光中保存。 [使用范围]:裂解细胞提取总蛋白质,主要用于Western,免疫沉淀,免疫共沉...
1、 NP-40是很温和的裂解液。，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。 2、原理： 迅速冷冻，使细胞核内正在转录的mRNA复合体处于冻结状态 加入ATP/GTP边混悬边加入4ml NP－40裂解液 10mM Tris-HCL, PH7.4 10mM NaCL 3mM。
(1)充分融解 NP-40 裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入 PMSF(Mw:174.2 g/mol),使其最终浓度为 1mM。 (2)贴壁细胞:吸除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可忽略此步)。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250ul 裂解液的比例加量。用枪吹打数下,...