茎环法逆转录使用特殊设计的茎环逆转录引物(Stem-loop RT Primer)进行逆转录,该引物由通用的茎环结构序列和6-8个miRNA 3’端反向互补碱基组成,通用的茎环结构不仅能有效地延长miRNA的逆转录产物长度,同时它自身互补的构象可以避免与其他同源基因结合,减少了非特异性扩增的几率。 末端加A尾法逆转录先由PolyA聚合酶...
4)逆转录:1ul茎环引物(stem-loop)+试剂盒中逆转录MIX(2ul+2ul)+free-RNase H2O(5ul)(to 20 ul) 5)一般来说,一次逆转录只能进行一个miRNA的单独逆转录,但是根据实际情况而言,我们可以将miRNA+内参U6混合在一管中一同逆转成cDNA。 根据以上试剂盒设计的加样量,我尝试过一管内混合逆转录内参+5个miRNA,其...
增加miRNA逆转录产物长度的另一种方法是使用一个非常长的逆转录引物对miRNA进行逆转录。这个长逆转录引物就被称作“茎环引物”,使用茎环引物获得的逆转录产物可直接用于后续的染料法或探针法荧光定量检测。 “ 逆转录引物(Stem-loop引物) ” 整个茎环法逆转录引物由两个部分组成: ①通用的茎环结构,自身形成的茎环...
4)逆转录:1ul茎环引物(stem-loop)+试剂盒中逆转录MIX(2ul+2ul)+free-RNase H2O(5ul)(to 20 ul) 5)一般来说,一次逆转录只能进行一个miRNA的单独逆转录,但是根据实际情况而言,我们可以将miRNA+内参U6混合在一管中一同逆转成cDNA。 根据以上试剂盒设计的加样量,我尝试过一管内混合逆转录内参+5个miRNA,其...
4)逆转录:1ul茎环引物(stem-loop)+试剂盒中逆转录MIX(2ul+2ul)+free-RNase H2O(5ul)(to 20 ul) 5)一般来说,一次逆转录只能进行一个miRNA的单独逆转录,但是根据实际情况而言,我们可以将miRNA+内参U6混合在一管中一同逆转成cDNA。 根据以上试剂盒设计的加样量,我尝试过一管内混合逆转录内参+5个miRNA,其...
检测成熟的 micro RNA 序列的表达水平，常用的是 stem -loop RT -PCR 。 1. 带有茎环结构的 特异 RT 引物 ，茎环结构的序列我们采用的是： 5‘GT CG TATC CAGTG CG TGT CG TGGAGT CG GCAATTGCACTGGATA CG AC 3 ’，再加上一段与你特定的 micro RNA3 ‘端互补的 6个碱基即可。 以 hsa...
Reverse primer: 5' CTCAACTGGTGTCGTGGA 3'(茎环引物上的一段序列) 图2. Stem-loop RT-PCR法检测miRNA的原理示意图 今天小达君给大家介绍美国Signosis公司的miRNA RealTime-PCR新方法: 基于自有T7-OLA专利技术,美国Signosis开发了一种高...
增加miRNA逆转录产物长度的另一种方法是使用一个非常长的逆转录引物对miRNA进行逆转录。这个长逆转录引物就被称作“茎环引物”,使用茎环引物获得的逆转录产物可直接用于后续的染料法或探针法荧光定量检测。 “ 逆转录引物(Stem-loop引物) ” 整个茎环法逆转录引物由两个部分组成: ...
1、miRNA常用实验方法一、 miRNA的检测方法miRNA的realtime-PCR检测方法1、 realtime-PCR引物设计miRNA realtime-PCR引物设计方法:1)stem-loop RT引物设计:基于通用的茎环结构,只需要按照不同的miRNA序列修改最末端6个碱基即可。通用茎环结构序列为:GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAC例如设计miR-1(UGG...
这个长逆转录引物就被称作“茎环引物”,使用茎环引物获得的逆转录产物可直接用于后续的染料法或探针法荧光定量检测。 “ 逆转录引物(Stem-loop引物) ” 整个茎环法逆转录引物由两个部分组成: ①通用的茎环结构,自身形成的茎环结构不仅能够有效地延长miRNA的逆转录产物长度,同时它自身互补的构象可以避免与其他同源...