miRNA的Real time PCR检测常用于验证miRNA 测序和芯片的差异结果。 一、技术原理 二、服务内容 (1)引物设计及引物合成; (2)MicroRNA抽提; (3)根据不同方法选择,进行逆转录; (4)采用Poly(A)加尾法或者茎环法,检测各个样品miRNA的表达量。 客户提供 (1)miRNA的名称或者登录号; (2)总RNA≥2ug),或提供满足...
随着温度的升高,最初退火和拉长的双链cDNA会越来越变性,释放出SYBR Green I,从而降低荧光信号。在引物特异性最佳的情况下,熔解曲线的第一个导数中应该只出现一个峰,而额外的峰则表明存在非特异性扩增产物或引物二聚体。 3.9、当使用CFX384Real-Time PCR检...
2011年Peter 对miR-Q 技术进行了改良【2】,对microRNA 进行加A 后,采用含tag 和oligo dT 的引物进行反转录,之后采用含特异性序列的上下游引物进行RealTime PCR (原理如图1B ),这样保证了microRNA 的扩增特异性,其可以很好的区分单个差异的microRNA 【结果如图2所示】。实际的大规模应用当中也显示,该方法确实...
2011年Peter对miR-Q技术进行了改良【2】,对miRNA进行加A后,采用含tag和oligo dT的引物进行反转录,之后采用含特异性序列的上下游引物进行RealTime PCR(原理如图1B),这样保证了miRNA的扩增特异性,其可以很好的区分单个碱基差异的miRNA【结果如图2所示】。实际的大规模应用中也表明该方法确实可以有效的对miRNA进行定量...
三、miRNA荧光定量PCR基本原理 实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光试剂,利用荧光信号实时检测PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR能够专一、灵敏、快速、高重复性地精确定量起始模板浓度。但是就成熟的microRNA而言,由于其是由21-25个核苷酸组成的小RNA,长度太短,并不能通过...
实时定量PCR(quantitativereal time-PCR,qRT-PCR)因为较好的灵敏度和特异性,并且可以获取特定组织或患者来源样本的全miRNAs表达谱,被认为是miRNAs检测的金标准,经常被用来验证全基因组筛选方法的结果,以及筛选临床相关的miRNAs亚群[7]。然而,由于成熟的miRNAs序列短,无法像mRNA那样...
Takara公司旗下Clontech品牌提供专用于microRNA Real-Time PCR检测的mir-X系列试剂盒,产品具有以下特点: 实验原理如下图所示: Mir-X™ miRNA qRT-PCR TB Green™ Kit的原理是在单管中一步法合成第一链cDNA,然后使用miRNA特异性引物和TB Green™试剂对cDNA进行特异性的定量扩增。 在Mir-X cDNA合成反应中,使...
Stem-loop实时定量RT PCR基本原理: microRNA的RT-PCR一般使用茎环结构的引物,这种具有茎环结构的引物针对所需检测的目的microRNA设计,具有特异的序列,结构示意图如下所示。内参使用的是小RNA U6,U6的反转录使用的是随机引物。将反转录的产物作为real-time PCR的模板,检测目的microRNA的引物是针对目的microRNA的特异...
使用Real-Time PCR进行microRNA和非编码 RNA分析 miRNA 谱分析 miRNA定量 miRNA 功能分析 使用实时荧光定量PCR进行Pri-miRNA分析 使用实时荧光定量PCR进行长链非编码RNA (ncRNA) 分析 小RNA分析 使用TaqMan 检测试剂盒进行 miRNA 分析 使用实时荧光定量 PCR 进行 Pre-...