Kex2蛋白酶在毕赤酵母中的表达、纯化和性质研究 刘颖颖;王之可;李素霞 【摘要】目的 研究Kex2 (EC.3.4.21.61)蛋白酶在毕赤酵母中的重组表达、纯化和部分性质.方法 Kex2基因整合进pPIC9K质粒中,通过电转构建重组毕赤酵母GS115-Kex2,G418筛选多拷贝子,甲醇诱导得到目的蛋白.通过强阴离子交换层析Q-FF对重组蛋白进行...
目前多用毕赤酵母(Pichia pastoris,P.pastoris)来表达Kex2蛋白酶,但有关毕赤酵母Kex2蛋白酶(PPKex2)的同源活性表达与酶学性质的研究还鲜有报道,并且Kex2蛋白酶较低的表达量导致其生产成本过高,不利于大规模的应用。 本课题利用毕赤酵母表达系统对PPKex2进行了同源表达,并研究其酶学性质,同时与酿酒酵母(Saccharomyces ...
本实验室成功利用毕赤酵母表达系统表达了含有Kex2 前肽、催化结构域、P 结构域和丝氨酸/苏氨酸富集区结构域的20～667 位氨基酸残基序列,利用毕赤酵母α-信号肽取代原Kex2 信号肽(1～19 氨基酸残基),可以得到直接分泌到胞外的目的蛋白[14]。然而在纯化过程中发现,Kex2 蛋白酶会出现自降解的现象,产生多条杂条带,...
1、设计蛋白序列时引入Kex2酶切位点,应用毕赤酵母表达系统表达,在后期的分泌表达过程中被酵母自身Kex2酶识别而酶切,从而实现重组蛋白的大量表达。国内已有许多相关文献,如重组人胰岛素在毕赤氏酵母中的分泌表达[3]、重组人甲状旁腺素pTH(1-34)在毕赤酵母中的分泌表达[4]、人表皮生长因子(hEGF)在毕赤酵母中的分...
Kex2 蛋白酶活.性不受常规的丝 氨酸蛋白酶抑.制.剂如抑肽 酶、PMSF、TPCK 所抑.制。蕞适作用 pH 为 pH9.0,稳定储存的 pH 为 pH5.0-6.0。 本品采用重组毕赤酵母篙效分泌表达技术,从中分离纯化得到,是高纯粹、高.活.性的重组 KEX2 蛋白酶。
Kex2 蛋白酶活.性不受常规的丝 氨酸蛋白酶抑.制.剂如抑肽 酶、PMSF、TPCK 所抑.制。蕞适作用 pH 为 pH9.0,稳定储存的 pH 为 pH5.0-6.0。 本品采用重组毕赤酵母篙效分泌表达技术,从中分离纯化得到,是高纯粹、高.活.性的重组 KEX2 蛋白酶。
Kex2 蛋白酶活.性不受常规的丝 氨酸蛋白酶抑.制.剂如抑肽 酶、PMSF、TPCK 所抑.制。蕞适作用 pH 为 pH9.0,稳定储存的 pH 为 pH5.0-6.0。 本品采用重组毕赤酵母篙效分泌表达技术,从中分离纯化得到,是高纯粹、高.活.性的重组 KEX2 蛋白酶。
Kex2蛋白酶在毕赤酵母中的表达,纯化和性质研究 目的研究Kex2(EC.3.4.21.61)蛋白酶在毕赤酵母中的重组表达,纯化和部分性质.方法 Kex2基因整合进p PIC9K质粒中,通过电转构建重组毕赤酵母GS115-Kex2,G418筛选多拷贝子,... 刘颖...
Kex2 蛋白酶活.性不受常规的丝 氨酸蛋白酶抑.制.剂如抑肽 酶、PMSF、TPCK 所抑.制。蕞适作用 pH 为 pH9.0,稳定储存的 pH 为 pH5.0-6.0。 本品采用重组毕赤酵母篙效分泌表达技术,从中分离纯化得到,是高纯粹、高.活.性的重组 KEX2 蛋白酶。