这些技术作为如今的研究中的常客，其中IP-MS是常用的在植物体内筛选互作蛋白的有效方法，Co-IP则常用于筛选后的蛋白之间的点对点验证，ChIP是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用，常用来检测转录因子结合位点，RIP用来研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，今天小源将选择IP-MS和Co-IP这两种技术，从原理、实验步骤...
1.未做IP实验,建议送细胞沉淀进行IP-MS检测。 ①细胞量不少于2×107(约两个10 cm培养皿,总蛋白量5mg左右)。一般来说,细胞量越多,IP-MS实验效果越理想。 ②其他样品:如组织、细菌和蛋白溶液等可根据蛋白含量进行换算。 2.做完IP实验后,建议送Beads进行MS检测。 ①Beads用PBS缓冲液清洗干净,以Beads沉淀形式保...
免疫沉淀-质谱分析技术(IP-MS)是一种基于抗体和抗原特异性结合的原理研究蛋白间互作的技术。通过能与目的蛋白结合的磁珠孵化,将能与目的蛋白结合的蛋白与其他蛋白组分分离,再通过与质谱联用,对这些分离出来的蛋白组分进行定性鉴定。, 视频播放量 136、弹幕量 0、点赞数
免疫共沉淀质谱联用(IP-MS)实验,可用来确认抗体与预期靶标的特异性相互作用,是确认抗体与预期靶标直接结合的重要方法。点击进入赛默飞官网查看IP-MS抗体验证详情!
植物IP-MS(Interaction Partner-Mass Spectrometry)技术是一种用于研究植物分子互作的实验方法。IP-MS原理主要包括以下几个步骤: 1. 表达载体构建:将目标基因与荧光标签(如GFP)融合,构建表达载体。将构建好的载体转化到植物材料中,使目标基因表达并产生荧光信号。 2. 植物材料处理:将转化后的植物材料进行适当处理,如...
在IP-MS实验中,非胶内酶切的方法通常包括以下步骤: 1. 细胞裂解,将含有目标蛋白的细胞用裂解缓冲液裂解,释放出蛋白质。 2. 免疫沉淀,将特异性抗体与目标蛋白结合,形成抗原-抗体复合物。然后使用蛋白A/G琼脂糖或磁珠来沉淀抗原-抗体复合物。 3. 洗涤,对沉淀后的复合物进行多次洗涤,以去除非特异性结合的蛋白质...
通过一次IP-MS实验,能高通量的鉴定和筛选到多个与要研究的目的蛋白(target)存在相互作用的蛋白质(蛋白质复合物组分),从而拥有属于自己的专属蛋白质相互作用数据库,能够进行更深入的生物学功能和分子机制的研究。 实验步骤 用Lysis Buffer裂解细胞,可以适当加上超声辅助,或者在冰上放置30 min,每10 min吹吸一次细胞,...
IP是一种经典的实验技术,通常会与SDS-PAGE和WB结合使用来检测蛋白。因此许多研究者在设计IP-MS实验进行互作蛋白筛选时,往往会参考以往IP-WB的实验经验以及传统蛋白质组学研究中的胶内酶解样品制备方法,而未能随质谱仪器性能的提升和数据分析方法的发展对实验方法和策略进行调整和优化,导致最终蛋白相互作用的检测结果并...