(2)用In-Fusion酶能识别双链线性化DNA片段5’→3’末端16个碱基,并使其降解,可知In-Fusion酶作用于磷酸二酯键,故In-Fusion酶的作用原理是识别线性化DNA片段末端,按照5’→3’方向,依次断裂磷酸二酯键,最终使线性化DNA片段两端出现黏性末端。依据目的基因和质粒的碱基序列设计引物A或引物B以保证过程②扩增出能与...
该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列,通常为15-20bp),然后用In-Fusion酶处理即可实现无缝连接。它的操作步骤大致为:①利用PCR技术将质粒线性化;②PCR扩增出两端含线性化质粒同源序列的目的基因;③目的基因与线性化质粒同源区域在In-Fusion酶作用下形成重组质粒;④将重组质粒...
无缝克隆是一种显著区别于传统酶切连接方法的新技术,该技术是依赖于同源序列的基因克隆技术,具有简单、快速、高效的特点。通过重组酶的作用,能够将任意含有载体末端重叠区域的 DNA 片段重组至线性化载体上,不…
IN-FUSION技术通过发现INFUSION酶，解决了上述问题。INFUSION酶能够识别线性化的DNA片段，形成粘性末端，使得目标质粒和载体在互补的粘性末端之间快速连接，无需酶切位点的限制，大大提高了连接效率和构建周期。与传统酶切连接技术相比，IN-FUSION技术连接效率高，构建周期短，尤其适用于3000bp以上的基因载体...
该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列,通常为15-20bp),然后用In-Fusion酶处理即可实现无缝连接。它的操作步骤大致为:①利用PCR技术将质粒线性化;②PCR扩增出两端含线性化质粒同源序列的目的基因;③目的基因与线性化质粒同源区域在In-Fusion酶作用下形成重组质粒;④将重组质粒...
Infusion重组酶是通过将两个或多个不同的基因片段从不同的生物体中拼接而成的。它利用了DNA重组技术,将目标基因从一个生物体转移到另一个生物体中,并大量繁殖这些被重组的基因片段。 整个重组酶的制备过程可以简单概括为以下几个步骤: 1. PRC扩增:首先,通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目标基因片段。PCR利用DNA...
In-Fusion无缝克隆采用单一酶而非混合酶的方案,依靠感受态细胞自身的酶系统将缺口修复,实现有校正功能的连接。尽管使用了单一酶方案,却还能实现高效稳定的无缝克隆,所以我们才说In-Fusion的酶与众不同,其反应体系优化方法先进、“功力”深厚! 充分优化的实验体系,无论单片段还是多片段克隆,统统只要15 min,正确率>95...
In-Fusion HD EcoDry Cloning Plus包含了所需的全部试剂——PCR酶,感受态细胞,凝胶提取试剂盒。 产品特点 · 冻干形式,易用性和稳定性。 · 无需亚克隆,可直接把任何插入片段克隆到任意载体的任意位点。 · 高效克隆,0.5 kb到15 kb宽广范围内都显示了超过95%的效率。 · 无缝克隆,不同于使用限制酶和TA克隆...
在传统的分子克隆中,我们经常通过PCR技术扩增得到目的基因后,先构建T-A克隆载体,将基因在大肠杆菌中进行扩增,然后酶切阳性T-A载体和目标载体,最后进行目的基因和目的载体的连接。这个过程大概需要1-2周来完成,而且具有很大的局限性,主要表现在:1、载体多克隆位点和基因内部酶切位点的局限性;2、基因克隆过程中需要...
利用PCR产物和线性载体末端的15 bp重叠序列,In-Fusion酶可以高效准确地将PCR产物和线性载体融合在一起。可以通过设计引物来扩增得到15 bp重叠序列。该方法无需亚克隆即可将单片段或多片段克隆到单一载体。 In-Fusion HD Cloning Plus组分 所有In-Fusion HD Cloning Plus kits包含 In-Fusion HD enzyme premix和control...