In-Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列,通常为15-20bp),然后用In-Fusion酶处理即可实现无缝连接。它的操作步骤大致为:①利用PCR技术将质粒线性化;②PCR扩增出两端含线性化质粒同源序列的目的基因;③目的基因与线性化质粒同源区域在In-Fusi...
ln—Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。该技术关键要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列,通常为15—20bp),并只用In—Fusion酶识别并切割3'末端的DNA序列(同源序列),从而实现无缝连接。操作步骤为: ①质粒线性化 ②PCR技术扩增出两端含线性化质粒同源序列的目的基因(图中只显示部分同源序...
Infusion克隆,更准确地说是In-Fusion克隆,是一种无缝克隆技术,其原理及特点如下: 一、原理 In-Fusion克隆技术与传统PCR产物克隆的主要差异在于,载体末端和引物末端应具有15~20个同源碱基。通过这种方法,得到的PCR产物两端会分别带上15~20个与载体序列同源的碱基。这些同源碱基之间会依靠碱基间的作用力互补配对成环,无...
如果觉得产物末端平滑化及5’磷酸化处理稍显复杂,而且希望有比平末端连接更高效率的环化方法,那么不妨请出我们的“老朋友”——In-Fusion无缝克隆技术! 是的!没错!就是那个通过一个15分钟的反应步骤即可有超过95%的概率成功的将1个或多个PCR片段...
克隆,把不同的DNA片段拼接在一起,得到理想的重组载体,就像把契合的拼图拼在了一起,得到了最终完美的图案。 而克隆实验,是否能像拼图游戏一样有趣,取决于是否选择了一个合理、高效的方法。 In-Fusion无缝克隆方法不受传统克隆方法的限制,无论载体类型或插入片段组成如何,针对各种克隆应用都能保持出色的准确性。甚 ...
(11 分)In-Fusion 技术是一项新型的无缝克隆技术。该技术的关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列,通常为15~20 bp),然后用In-Fusion酶(能识别双链线性化DNA片段5'→3'末端任意16个碱基,使其降解)处理即可实现无缝连接。 其操作步骤如图。 回答下列问题:引物1引物2引物A目的基因...
In-Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列,通常为15～20bp),然后用In-Fusion酶处理即可实现无缝连接。它的操作步骤大致为:①质粒线性化;②PCR扩增出两端含线性化质粒同源序列的目的基因;③目的基因与线性化质粒同源区域在In-Fusion酶的作用下...
无缝克隆是一种显著区别于传统酶切连接方法的新技术,该技术是依赖于同源序列的基因克隆技术,具有简单、快速、高效的特点。通过重组酶的作用,能够将任意含有载体末端重叠区域的 DNA 片段重组至线性化载体上,不受酶切位点限制,载体自连背景极低。 无缝克隆实验原理 ...
In-Fusion无缝克隆采用单一酶而非混合酶的方案,依靠感受态细胞自身的酶系统将缺口修复,实现有校正功能的连接。尽管使用了单一酶方案,却还能实现高效稳定的无缝克隆,所以我们才说In-Fusion的酶与众不同,其反应体系优化方法先进、“功力”深厚! 充分优化的实验体系,无论单片段还是多片段克隆,统统只要15 min,正确率>95...