In-Fusion克隆原理基于同源重组,是一种无缝克隆方法。以下是其详细原理: 同源重组原理:In-Fusion克隆与传统PCR产物克隆的主要区别在于,载体末端和引物末端应具有15-20个同源碱基。这样,通过PCR得到的产物两端就会分别带上15-20个与载体序列同源性的碱基,这些同源序列能够依靠碱基间的互补配对作用形成环状结构,从而无需酶...
(2)原理:DNA双链复制。(3)前提条件:要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一-对引物。(4)条件:模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。(5)过程:高温变性:DNA解旋过程(PCR扩 增中双链DNA解开不需要解旋酶,高温条件 反馈 收藏 ...
In-Fusion无缝克隆,远没有你想的那么普通! 无缝克隆是一种显著区别于传统酶切连接方法的新技术,可在任意载体的任意位置进行单片段或多片段的定向克隆,化繁杂的酶切连接操作为一步简单的无缝克隆反应,大大提高工作效率。 关于无缝克隆的原理,我们经常接触的是这样言简意赅的解释: 基于插入片段和线性化载体末端15-20...
核心技术原理 In-Fusion技术的核心在于同源重组机制的创新应用。其工作原理可分为三个关键阶段: 同源序列设计:在目的基因两端人工添加与线性化载体末端完全匹配的15-20bp同源序列,这段短序列相当于分子级别的'邮政编码'。 酶促反应:In-Fusion酶(含核酸外切酶和DNA聚合酶)首先切割DNA末端产生粘性...
无缝克隆的原理可以简单地解释为将一个物体或者生物的所有特征和性质复制到另一个物体或者生物上。这包括了物体或者生物的形态、结构、功能和行为等方面。为了实现无缝克隆,科学家们需要解决几个关键问题。 无缝克隆需要获取原始物体或者生物的详细信息。这可以通过对原始物体或者生物进行观察和测量来实现。科学家们使用各...
In-Fusion无缝克隆原理 In-Fusion依靠载体和插入片段的末端的同源序列完成无缝克隆。 1 在载体的插入位点,可以通过限制酶酶切或反向PCR的方法,将载体线性化。 2 将线性化载体末端的15 bp序列,添加到插入片段的PCR引物5’端,PCR后即可得到末端和载体同源的插...
In-Fusion的原理 In-Fusion克隆技术的基础是Clontech的In-Fusion专利酶,此酶通过识别DNA片段和线性化载体末端的15 bp同源序列将DNA片段和线性化载体高效精确地融合在一起。你只需将目的片段和线性化载体与预混合酶试剂相混合,在50℃孵育15分钟就行了。
缺点：连接效率低耗时较长需要特定限制性酶切位点 2 April12,2021 • In-Fusion克隆产品 In-Fusion®HDCloningSystem 任意载体任意基因片段 这是一款让您随心所欲地实现基因定向克隆的产品！3 April12,2021 • In-Fusion®基因克隆特点 4 • 主要内容 1In-Fusion®克隆技术的原理2In-Fusion®优点及...
In-Fusion和In-Fusion Snap Assembly的基本原理是一样的,都是依赖于同源序列的克隆技术,需要线性化载体与插入片段末端有15-20bp的重复序列。 In-Fusion和In-Fusion Snap Assembly采用单酶体系,利用In-Fusion专利酶,通过识别DNA片段(例如PCR片段和线性化载体)末端15 bp的同源序列来实现高效、准确地融合。In-Fusion酶...