HEK293T贴壁细胞瞬时转染：1. 使用 12.5 mL 培养基将 HEK293T 细胞接种到 10 cm 板中，以在日培养后达到 70-80% 的融合度。2. 为了提高转染和生产过程中的细胞粘附，用无菌聚 L-赖氨酸0.01% (w/v)，75–150 kDa，细胞培养级）制备板 15 分钟，然后用无菌磷酸盐缓冲盐水（PBS；137 mM NaCl、2.6...
产品名称:HEK293细胞转染试剂 产品简介: PEI线性转染试剂(PEI Prime Powder, Transfection Grade Linear Polyethylenimine):PEI Prime是以一种阳离子高分子聚合物-聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)为载体的基因转染试剂。PEI是在pH中性溶液中具有*正电荷密度的合成聚合物。带正电的PEI与带负电的DNA牢固结合,并赋予净阳...
在悬浮 HEK293-6E 细胞中瞬时转染和生产 1. 在悬浮HEK293细胞中进行瞬时生产。简而言之,转染前两天 5×10 5细胞/mL HEK293-6E 在 25 至 150 mL 无血清培养基(不含 G418)中接种到 125 至 1000 mL 带通气膜盖的聚碳酸酯锥形瓶中,并在 37°C 和 110 rpm 下孵育在轨道振动器中。 2. 对于小规模生产...
2.2 产生稳定的生产细胞系HEK293SF-LVP-CMVGFPq-92(克隆92)并诱导LV产生 根据制造商建议,使用maxiprep试剂盒(Chiagen)纯化质粒。先前已经阐述通过一步法获得构建HEK293SF-LVP-CMVGFPq-92所使用的包装细胞系(即,所有LV组分在一次转染中同时加入) 14 。为了构建clone 92,使用Lipofectamine 2000试剂(Life Technologies...
慢病毒载体通常是通过多质粒瞬时转染HEK 293贴壁细胞株而产生,此细胞株通常培养于含血清的培养液中。然而这种方法是实验室密集型,需依赖质粒的供应,不能直接放大。贴壁培养需通过增加细胞附着和生长的可用面积来放大。由于瞬时转染中过量的质粒和转染试剂的残留,会引起终产物的污染。因此,稳定的慢病毒载体生产细胞株运行...
大约在转染完成后的48h,可以对细胞的转染效率和蛋白表达进行检测。 检测时,转染效率=检测阳性细胞数/检测时总细胞数*100%,一般使用流式细胞术进行检测。 3. 转染试剂 常用的转染试剂有Higene、Lipo系列、PEI,个人推荐PEI,因为转染效率和价格平衡的比价好。 4. 转染条件和过程 以PEI用作转染试剂的转染为例,配制...
1.2对HEK293细胞进行预培养和分装。将HEK293细胞进行培养,保持在良好的生长状态,并按照实验需要将细胞分装到培养皿或板中。 2.转染操作 2.1 将转染试剂预冷至室温。一般来说,转染试剂包括聚乙烯亚胺(PEI)或脂质体(如Lipofectamine 2000)等。根据实验需要,选择适当的转染试剂,并将其预冷至室温。 2.2在转染试剂中稀...
为支持HEK293相关细胞系病毒载体残留DNA质控研究,基于荧光定量PCR法,ACROBiosystems百普赛斯现推出resDetect™ HEK293T残留DNA检测试剂盒,能够专一、快速的对质控样品中的resDNA进行准确定量,可更好满足不同包装细胞系下应选择对应细胞系基因组作为参考标准品的需求,保证质控结果的可靠性。
HEK293常用于病毒载体的生产。由于在病毒载体生产过程中存在提供辅助功能的腺病毒E1A/B基因,因此将其用于腺病毒和腺相关病毒载体的生产。在逆转录病毒载体生产中,由于SV40大T抗原在细胞系中的表达,使用HEK293T。 T抗原的表达允许携带SV40复制起点的质粒在转染细胞时进行复制(DuBridge et al.,1987)。还报告大T抗原...
试剂中穿膜肽DLR8:脂质体的质量比为4～8.8:1.所述HEK293细胞瞬时表达转染用试剂和瞬时表达系统转染方法中,选择穿膜肽DLR8与脂质体混合物作为HEK293细胞瞬时表达的转染试剂,高糖DMEM培养基作为转染孵育Buffer,并在细胞转染处理后48h进行细胞悬浮,添加小分子添加剂丁酸钠,提高了HEK293细胞外源蛋白的表达水平,使得目的...