flp 稳转细胞原理flp 稳转细胞原理 FLP/FRT系统概述。 FLP/FRT系统来源于酿酒酵母,FLP(Flippase)是一种重组酶,能识别特定的FRT(FLP Recombination Target)位点,并介导两个FRT位点之间的DNA序列发生重组。FRT位点是一段特定的DNA序列,通常由两个13bp的反向重复序列和中间8bp的核心序列组成,长度一般为34bp。 构建含...
FRT是Flp的识别位点,全长48bp,由3个13bp的反向回文序列和8bp的间隔序列共同组成。与间隔序列相邻的两个反向回文序列是Flp重组酶的识别和结合区域,间隔序列是重组发生的区域,也决定了整个序列的方向。 Flp-FRT系统与Cre-LoxP诱导基因重组的方式类似,这两个系统比较明显的区别是这个重组酶(Cre和Flp)具有不同的最佳...
从进化的角度上考虑,Flp/FRT系统是Cre/loxP系统在真核细胞内的同源系统。其中.重组酶Flp是酵母细胞内的一个由423个氨基酸组成的单体蛋白。与Cre相似,Flp发挥作用也不需要任何辅助因子,同时在不同的条件下具有良好的稳定性。 该系统的另一个成分Flp识别位点(Flp recognition target,FRT)与loxP位点非常相似,同样由两...
位点特异性重组(site-specific recombination)技术是近 20 年来发展起来的一项重要的分子生物学技术,该系统主要是通过借助能够识别特异性位点的重组酶(site-specific recombinase,SSR),在基因组上对外源 DNA 进行操作,可以实现基因的置换、倒置和删除等。FLP/FRT 系统就属于位点特异性重组系统的一种。 FLP是一个重组酶...
Flp/FRT系统与Cre/LoxP系统相似，但其重组酶（Flp）和识别位点（FRT）在结构和功能上有所差异。这两个系统均能介导DNA序列的重组，但Flp重组酶的最佳作用温度为30℃，这使得它在动物体内应用时与Cre重组酶形成互补。这两种系统均能实现特定基因的条件性敲除或敲入，但它们的工作原理和应用条件有所不同...
摘要:来源于酵母2 μm质粒的FLP/FRT位点特异性重组系统已经被广泛应用于拟南芥、水稻、小鼠、果蝇、线虫等高等真核模式生物,正逐渐成为转基因动植物研究领域进行基因操作的强有力工具。笔者综述了FLP/FRT系统的重组原理及其在高等真核生物中的应用,系统地概述了该系统在转基因植物、哺乳动物、昆虫以及其它相关高等真核...
按照工作原理及切除过程的不同,FLP/FRT位点特异性重组系统大致可划分为3种基因删除方式, 即:简单删除、控制删除及高效删除. 2.1简单删除 简单删除是FLP/FRT位点特异性重组系统最先采用的删除方式.研究者首先要构建两个载体,一个载体上构建有FLP重组酶基因,另一个载体则构建有2个同向的FRT序列,选择标记基因位于2个...
笔者综述了 FLP/FRT 系统的重组原理及其在高等真核生物中的应用,系统地概述了该系统在转基因植物、哺乳动物、昆虫以及其它相 关高等真核模式生物中的研究现状,讨论了FLP/FRT 系统在研究中存在的主要问题、应用前景和发展方向。 关键词:FLP/FRT 系统;位点特异性重组;转基因;高等真核生物 Progress in Research of ...
来源于酵母2 μm质粒的FLP/FRT位点特异性重组系统已经被广泛应用于拟南芥、水稻、小鼠、果蝇、线虫等高等真核模式生物,正逐渐成为转基因动植物研究领域进行基因操作的强有力工具.笔者综述了FLP/FRT系统的重组原理及其在高等真核生物中的应用,系统地概述了该系统在转墓因植物、哺乳动物、昆虫以及其它相关高等真核模式生...