为了纠正 这种现象,增加FL1漏到FL2荧光的补偿%(这可能在1-5%之间)。如果这个调节没有有效地去 除FL2的阳性信号,此时要降低FL2PMT的电压。 4.检测PI单染的细胞并检查FL1-FL2散点图, ;此时PI的荧光被FL1PMT检测到了。为了纠正这种现象,增加FL2漏到FL1荧光的补偿%(这可能在15-25%之间)。如果这个调节没...
2) PI-DNA 复合物的最大激发波长为535 nm,最大发射波长为 615 nm,PI 的红色荧光在 FL2 或 FL3 通道检测,建议使用 FL3。 3) 流式细胞仪检测分析时选择合适的电压并调好光补偿,除实验组外建议设置阴性对照(不加Annexin V-FITC 和 PI 标记)用于调节电压,单标对照(只加 Annexin V-FITC,以及只加 PI 的...
因为荧光补偿设置与PMT的电压直接相关,所以不同仪器之间的补偿不同。建议在实验开始阶段分析经Annexin V、PI分别单染的细胞来调整荧光补偿去除光谱重叠。根据未处理细胞空白对照和经Annexin V、PI分别细胞染色后的单染对照的分析设定十字门的位置;4 正常细胞:Annexin ⅴ-FITC (-);PI (-); 早期凋亡细胞:Annexin ⅴ...
7. PerCP-Cy5.5：复合染料，最大发射波长为695 nm。与PerCP相反，PerCP的光量子产率较低，适用于表达水平较高物质的检测，PerCP-Cy5.5光量子产率高，可用于表达水平较低物质的检测。在双激光管仪器上与APC共同检测时，需要做补偿调节，但比PerCP补偿少。8. PI/7-AAD：碘化丙啶（propidium iodide，PI）和7...
A:绿色荧光可以使用 488nm 激发,PI 是红色荧光,使用 535nm 激发 Q4:FITC 和 PI 孵育时间过短,对结果有什么影响? A:孵育时间过短,影响装载效果,时间过长,也要考虑细胞本身的状态。 Q5:想问一下用流氏检测应该怎么设门? A:用阴性未染色的细胞调电压,门设置,annexin V-FITC 单染、PI 单染来调补偿。
补偿可以在检测的时候在机器上调节，也可以做完后使用软件分析数据的时候调节~很简单的~...
单染管:分别需要只加PI和荧光标记的Annexin V两个单染管,用来调节2个荧光通道的补偿值; 荧光素之间的补偿值应保持恒定;双荧光染色时,如果一个荧光很强,而另一个很弱,则一定要做补偿;补偿只应用在同一个激光激发的不同荧光素之间,避免补偿不足和过度补偿。【3】 ...
注:a)流式细胞仪检测请取阴性样本(如未经药物处理的活细胞)进行 Annexin V-FITC 和 PI 双染,作为阴性对照;另取阳性样本(如毒性药物处理的细胞)分别进行 Annexin V-FITC 和 PI 单染,作为调节荧光补偿的单阳对照。 b)流式细胞仪检测时 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道,PI 优先选 PerCP/Cy5.5 通道,其次是 ...
1. Annexin V-EGFP,Propidium Iodide (PI)避光保存及使用。 2. Propidium Iodide (PI)有毒,操作时要戴手套。 3.推荐使用悬浮培养细胞,如果是贴壁细胞,用胰酶消化不当,会引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。