3. 如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且无法通过调整相关设置和参数来改善,可以考虑使用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,以有效减少假阳性的坏死细胞。 总之,DCFH-DA作为一种常用的ROS探针,具有广泛的应用前景。通过对其原理和使用方法的深入了解,...
将DCFH-DA按1∶1000稀释于无血清培养液中,终浓度为10μmol/L。细胞收集后悬浮于稀释好的DCFH-DA中,浓度为一百万至二千万/mL。37℃培养箱内孵育20分钟,每隔3～5分钟颠倒混匀。用无血清培养液洗涤细胞三次,去除未进入细胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照或感兴趣的药物刺激细胞,或把细胞等分成若干份后刺激。
DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup以便于活性氧的检测。Rosup...
活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DCFH-DA检测活性氧的试剂盒。DCFH-DA本身无荧光，能自由穿透细胞膜，进入细胞后被酯酶分解成DCFH。DCFH不能穿透细胞膜，因此很容易进入细胞。细胞内的活性氧氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF，荧光强度可反映细胞内活性氧水平。试剂盒内含活性氧阳性对照Rosup，用于检测活...
在激发波长502nm,发射波长530nm附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测DCF荧光,从而测定细胞内活性氧水平。本试剂盒仅适用于各种真核培养细胞的检测,提供了活性氧阳性对照试剂,以便于活性氧的检测。储存条件:-20℃保存。【注】● DCFHDA探针在2-8℃时是固体状态,从...
8. 阳性对照的建立：可以通过添加肿瘤促进剂（PMA，工作浓度 100 pM～10 μM）、H2O2 或 TBHP（终浓度约 100 μM）来刺激细胞产生氧化活性。根据细胞的灵敏度和反应性，可以适当调整浓度。9. 确保其他化合物或刺激试剂不会引起染料荧光淬灭。同时，检查化合物的吸收光谱，以确认化合物的吸收峰不会与...
荧光显微镜观察,用活性氧阳性对照刺激细胞后荧光明显增强。相关搜索:活性氧荧光探针(DCFH-DA),DCFH-DA,H2DCFDA,活性氧荧光探针,ROS荧光探针,2',7'-二氯荧光素二乙酸酯,2,7-二氯二氢荧光素二乙酸,2',7'-Dichlorodihydrofluorescein Diacetate,4091-99-0...
7.建立阳性对照,可能用以下方法刺激氧化活性: ①肿瘤促进剂(PMA,工作浓度100pM~10μM) ② H2O2或TBHP(终浓度~100μM)(根据细胞本身对其的灵敏度和反应性来提高或降低浓度) 8.确保刺激药物或化合物不会引起染料荧光淬灭。检查化合物的吸收光谱,确定化合物的吸收峰不会与氧化后染料的大激发或发射光谱发生重叠。
7.建立阳性对照,可能用以下方法刺激氧化活性:①促进剂(PMA,工作浓度100pM~10μM)② H2O2或TBHP(终浓度~100μM)(根据细胞本身对其的灵敏度和反应性来提高或降低浓度)8.确保刺激**或化合物不会引起染料荧光淬灭。检查化合物的吸收光谱,确定化合物的吸收峰不会与氧化后染料的大激发或发射光谱发生重叠。 西安齐岳...
2. 将H 2DCFDA 稀释在PBS 中成为1-10 μM 的工作液（不同细胞最适浓度可参考文献），加入细胞，37℃避光孵育30分钟，然后用0.05%胰蛋白酶-EDTA 溶液收集细胞，悬浮在新鲜培养基中，立即用流式细胞仪分析。3. （可选步骤）如果需要，使用ROS 不敏感的荧光素染料 DCFDA 作为阳性对照，与H 2DCFDA 探针一起...