用LentiPool sgRNA 文库对表达 Cas9 的细胞进行慢病毒转导 使用嘌呤霉素进行选择 抗性细胞的扩增 采用阳性或阴性选择进行初步筛选: 阳性选择 (+):对细胞进行处理(例如,药物、化学扰动) 阴性选择 (-):将细胞分为对照和实验样品 仅对实验样品施加选择性压力或处理 ...
CRISPR/Cas9文库筛选基本流程 1. sgRNA文库的设计与合成：确定待研究的基因列表，选择合适的sgRNA设计软件（如CRISPR-FOCUS、CHOPCHOP、CRISPR library designer（CLD）、Cas-designer等）。为确保基因能够被编辑，每个基因一般设计4-6个sgRNA。2. 慢病毒载体的构建及感染宿主细胞：将sgRNA文库进行慢病毒包装，并以较低...
CRISPR/Cas9文库筛选基本流程 1. sgRNA文库的设计与合成:确定待研究的基因列表,选择合适的sgRNA设计软件(如CRISPR-FOCUS、CHOPCHOP、CRISPR library designer(CLD)、Cas-designer等)。为确保基因能够被编辑,每个基因一般设计4-6个sgRNA。 2. 慢病毒载体的构建及感染宿主细胞:将sgRNA文库进行慢病毒包装,并以较低的病毒...
2022年3月,Takashi Ishio等人在Blood发表“Genome-wide CRISPR screen identifies CDK6 as a therapeutic target in adult T-cell leukemia/lymphoma”,该研究使用Brunello慢病毒sgRNA表达文库筛选发现:多个成人T细胞白血病淋巴瘤(Adult T-cell leukemia/lymphoma, ATLL)特异依赖的关键基因,并针对CDK6深入探究,证明TP53...
CRISPR文库筛选是一种基于CRISPR/Cas9技术的高通量基因筛选方案，通过构建包含成千上万个sgRNA的文库，并将这些sgRNA克隆到慢病毒载体中，以低MOI感染靶细胞。这种方法可以确保每个细胞只被一种sgRNA感染，从而实现针对不同sgRNA对应基因的功能筛选。对此，小编为大家推荐艾迪基因畅销的三款文库现货，并附上该文库相关研究...
CRISPR/Cas9文库筛选基本流程主要包含以下5点: 1)sgRNA文库的设计与合成:确定待研究的基因列表,选择合适的sgRNA设计软件(如CRISPR-FOCUS、CHOPCHOP、CRISPR library designer(CLD)、Cas-designer等)。为确保基因能够被编辑,每个基因一般设计4-6个sgRNA。 2)慢病毒载体的构建及感染宿主细胞:将sgRNA文库进行慢病毒包装,并...
CRlSPR/Cas9gRNA文库筛选是利用CRlSPR/Cas9技术建立的动物全基因组或某类相关基因的gRNA文库，通过慢病毒侵染方式导入目的细胞，对细胞进行编辑，然后功能性筛选和富集细胞，通过NGS测序和生信分析的手段，筛选出具有特定功能的基因。gRNA文库筛选技术具有高效、精准、高通量等特点，目前已被广泛应用于疾病研究、药物开发...
CRISPR/Cas9高通量筛选技术是一种强大的工具,特别适用于肿瘤细胞的阳性或阴性筛选。通过这种技术,我们可以对靶向候选基因(编码和非编码基因)的导向RNA(GRNA)进行富集,从而找到我们感兴趣的目的基因。整个流程包括以下几个步骤: 慢病毒文库构建 📚 首先,我们需要构建一个慢病毒文库。这个文库将包含所有可能的GRNA,它们...
第一步:高通量测序或文库筛选 首先,我们通常会用到高通量测序或者文库筛选的方法。在铜死亡的研究中,研究者们使用了CRISPR/Cas9的文库筛选方法。这种方法能更直接地找到引起特定表型的基因。相比之下,测序结果可能会有点“混乱”,因为它只能告诉你某个基因在某个水平(转录或蛋白)上的变化,但不一定能直接告诉你这个...
Crispr文库筛选的方法通常分为两个主要步骤:构建文库和筛选文库。首先,构建文库需要利用sgRNA设计软件如CRISPR-FOCUS、CHOPCHOP、CRISPR library designer(CLD)等批量设计sgRNA,再利用oligo芯片合成。sgRNA文库构建完成后还需进行sgRNA文库质粒的扩繁达到后续筛选实验所需使用量,当然文库质量的控制则需要高通量测序来获得,一旦...