10. 获得单克隆细胞株 当肉眼可见类似于菌落的细胞团时,将其从大盘或96孔板消化下来转移至12或24孔板中继续扩大培养。注意不要污染到其它细胞团,不要选取过密的细胞团。 11. 扩大培养,提取细胞全基因组DNA和细胞总蛋白 12. 测序 Guide序列上游1...
⽰的filler。另U6启动⼦需要5’端的G起始转录，因此若设计的oligo第⼀个碱基⾮G，需额外 增加⼀个G。操作详细流程 1. 设计sgRNA 关于sgRNA的设计我们有专门开过⼀篇⽂章《⼀⽂掌握gRNA的设计，常⽤⽅法汇总解 析》[点击此处阅读]确定靶基因的序列，可通过在线⽹站设计(http://tools.genome-...
输入基因的name,填写email address,设计结果稍后会发送到此邮箱,选择序列的类型以及物种。如sequence type选择unique region,一次只能输入23~500bp的基因片段,最好一次只输入一个外显子,避免guide序列跨越内含子,都选择键入后点击提交,关注邮箱或者在线等。 分析中,显示你所键入的基因序列里有36对可选的guide序列。 分...
编者按:之前科研小助手就为大家分享了一篇『手把手教你利用CRISPR-Cas9系统精准敲除靶标基因』,今天为大家带来了升级版,同时科研小助手获得了该老师的独家授权,可以有偿为大家提供本文相关质粒,具体请按照文末提示加小编微信咨询。 DNA Fragment Knockout ...
CRISPR-Cas9全程实操教程:从gRNA设计到挑单克隆全程指导 一文教会你利用CRISPR-dCas9技术调控内源基因的转录激活与抑制 一文教你用CRISPR/Cas9在细菌中敲除特定基因! dCas9-SAM技术应用详解以及慢病毒包装详细操作手册 不过之前的介绍都是Protocol性质的,前几日在CRISPR/Cas9交流群里,群友元叶为大家分享了一个网址非常...
⽰的filler。另U6启动⼦需要5’端的G起始转录，因此若设计的oligo第⼀个碱基⾮G，需额外增加 ⼀个G。操作详细流程 1. 设计sgRNA 关于sgRNA的设计我们有专门开过⼀篇⽂章《⼀⽂掌握gRNA的设计，常⽤⽅法汇总解析》[点 击此处阅读]确定靶基因的序列，可通过在线⽹站设计(http://tools.genome-...
另一种是阴性选择,可以确定特定条件下生存的必须基因,如果一个细胞携带了靶向生存必须基因的gRNA,那么敲除后的细胞不能存活。(图7) 图7-Nagative selection CRISPR文库的质粒系统 有两种CRSIPR/Cas9文库系统,一种是单质粒系统,包括了启动子、gRNA、Cas9以及筛选标记(图...