•ZFN作为基因治疗的手段之一,如果在生物体内使用,可能会引 发免疫反应。而现有的研究手段尚不能预测引入的ZNF蛋白是否会 引起免疫系统的进攻。第九页,编辑于星期五:十五点十一分。 TALEN TALEN(Transcriptionactivator-likeeffectors):一种源于植 物致病菌的靶向基因操作技术。 科学家发现,来自植物细菌Xanthomonassp....
pCRISPR质粒货号:kl-zl-0325 规格:20ul 柯雷生物提供质粒均经过严格的多重验证,如存在质量问题,请在收到产品的一个月内通知我司。收到质粒...
6. 将Guide RNA2 从pHH-hU6-gRNA转入到Px458M /Px459M-Guide RNA1得到插入双Guide RNA的载体Px458M /Px459M-Guide RNA1-Guide RNA2(以pHH-hU6-A-gRNA为例,也可以选用A的其他酶切位点,或者不同酶切位点的pHH-hU6-B-gRNA) 7. 割胶回收 pHH-hU6-gRNARNA2消化后割取 460 bps条带回收; PX45...
bioinfor.yzu.edu.cn/sof进行在线使用或下载桌面版。中文视频教程发布在 bilibili.com/video/BV1t。同时,已建立软件交流及功能答疑QQ群(551407271),软件使用中存在的问题可在群中咨询。 图2 软件界面 扬州大学张韬教授、西南大学张勇教授为论文共同通讯作者,扬州大学硕士毕业生韩阳朔(现为西南大学在读博士生)、扬州...
使用这个系统,Cas9被引导到靶序列切割DNA形成DNA双链断裂(DSB)。细胞通过两种方法中的一种修复断裂,非同源末端连接(NHEJ)或同源重组修复(HDR)。细胞最常利用的是NHEJ,它在Cas9介导的基因组修饰中具有高效率。然而,NHEJ的精确度很差,经常导致插入或缺失(INDELS)而引发难以预测的后果。许多研究人员期望在可控条件下...
使用Snapgene一键生成oligo,Actions--Anneal Oligos image.png 粘贴事先准备好的序列--保存Oligo文件 image.png 2. 使用Snapgene模拟插入质粒后的情况 (1)打开一个pSpCas9质粒--actin--restriction cloning--insert fragment image.png (2)在Vector选项卡,选择内切酶为BbsI,在insert部分选择上一步中保存好的oligo,最后...
对于难以转染的细胞系,可使用电转或者特殊的转染试剂,再根据荧光或者抗性筛选。 将细胞消化过筛后种96孔板,每孔种一个细胞,前提是要有活细胞工作站,可以定时拍照1星期以上,从而确定单细胞克隆,如果没有这样的仪器,网络上还有其他筛选单细胞的教程,比如稀释法等等(我觉得直接种1孔1个细胞就OK,种完就找到得力的...
Alt-R™S.p.Cas9 Nuclease 3NLS强大的编辑能力。 Alt-RCRISPR-Cas9系统包括强大的Alt-RS.p.Cas9 Nuclease 3NLS。当Alt-RS.p.Cas9Nuclease 3NLS与Alt-RCRISPRcrRNA 和tracrRNA结合后形成RNP,这个系统体现出优于其他方法的编辑能力, Figure 2, 。转染RNP可以更好的控制编辑复合物的使用量。另一方面,不可再生...
基因组编辑技术应用p 基因组巡航导弹,分子剪刀,DNA外科医生p 定点突变,定点修饰(包括得到转基因),转录调控p 基因治疗(如遗传病)基因编辑的三大利器 ZFN (Zinc-finger nucleases, ZFN) TALEN(transcription activator-like effector nucleases) CRISPR/Cas (clustered regulatory interspaced short palindro 6、mic repeat...
由于我们是实验教程,因此便不再详细介绍CRISPR/Cas9的细节,在这里只做一个大概的介绍,主要材料为最近整理的思维导图。温馨提示:如果不需要了解背景知识,可直接跳到第4点,实验方案正文部分。 1. 是何物? 1.1 CRISPR CRISPR是古细菌及细菌抵抗病毒的机制,当病毒攻击细菌时,细菌将该病毒的部分DNA整合到自身基因内组成...