LentiArray CRISPR 文库 以阵列板形式提供,每孔含一个基因靶点(可多达 4 个 gRNAs)。与高通量筛选平台相容。 LentiPool CRISPR 文库 将不同 gRNA 慢病毒在一个管中混合。无需高通量基础设施即可进行 CRISPR-Cas9 筛选。 CRISPR 文库使用我们的专有 gRNA 设计算法构建,整合了最新的研究成果和我们广泛的内部经验。
不同的细胞最佳 MOI 不一样,而且也取决于细胞对 Cas9 蛋白的耐受。 ⑩ 选择最合适的 Cas9 稳转株后,扩培并冻存细胞供后续使用。 ⑪ 接下来就可以根据文库的大小,扩培需要的 Cas9 细胞量。 *注意:Cas9 稳转株构建好后,建议使用之前验证过的 sgRNA 进行编辑效率测试,编辑效率直接决定后续筛选的效果。 5. sgRN...
2. 慢病毒载体的构建及感染宿主细胞：将sgRNA文库进行慢病毒包装，并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系，确保每个细胞只进入1个病毒，从而实现每个细胞只有一个基因被编辑。3. 阳性或阴性筛选：根据研究目的不同，CRISPR高通量筛选分为阳性筛选和阴性筛选。阳性筛选指施加一定的筛选压力（如药物），经文库扰动...
Values indicate log2-transformed fold change in abundance following HIV infection. Values for the uninfected group are from GXRCas9 cells that were transduced with the genome-wide sgRNA library and cultured for 3 weeks. Cas9X 海星生物一站式CRISPR文库筛选方案,包括sgRNA文库定制、文库质粒构建、文库质...
解决办法①：使用小量文库病毒来优化转染效率 原因②：过度传代 解决办法②：过度培养会使pool产生偏差。在细胞达到最佳筛选数量时就应该实行筛选操作了。五、CRISPR文库筛选FAQ 1. 对于MOI本身很高的细胞，应该怎么转染？如果目标细胞本身的MOI很高，可以尝试使用更低的病毒载量进行转染，以避免过度表达Cas9对细胞的不利...
涵盖过表达/干扰、CRISPR/Cas9、Cumate诱导表达系统、Tet-on/off系统、Cre-loxp系统等专属您的定制慢病毒,同时也涵盖CRISPR/Cas9敲除或激活文库、自噬单标或双标、萤光素酶现货慢病毒产品。 结合和元生物自主研发获批专利的Vpack慢病毒包装系统,能够攻克病毒不出毒和滴度低的问题,能保证lncRNA表达更精确,载体荧光表达...
运用CRISPR/Cas9 高通量筛选技术在肿瘤细胞进行的阳性或阴性筛选,可以对靶向候选基因(编码和非编码基因)导向RNA(GRNA)进行富集,进而寻找感兴趣的目的基因。该技术的完整流程包含以下步骤:慢病毒文库构建,文库病毒感染细胞,细胞实验筛选,基因组DNA提取与二代测序文库构建,二代测序与生物信息学分析。
CRlSPR/Cas9gRNA文库筛选是利用CRlSPR/Cas9技术建立的动物全基因组或某类相关基因的gRNA文库，通过慢病毒侵染方式导入目的细胞，对细胞进行编辑，然后功能性筛选和富集细胞，通过NGS测序和生信分析的手段，筛选出具有特定功能的基因。gRNA文库筛选技术具有高效、精准、高通量等特点，目前已被广泛应用于疾病研究、药物开发...
全基因组sgRNA文库可同时对多个细胞的不同基因进行编辑，之后，辅以特定的筛选方案，通过功能性筛选和富集、PCR扩增、NGS测序和生信分析等手段，可确认符合条件的相关基因。由于基因组序列中原间隔序列邻近模块序列（protospacer adjacent motif，PAM）的广泛存在，运用CRISPR/Cas9技术基本能实现对基因组中所有基因的编辑。