这种DNA双链断裂可以提高这个特定位点的重组效率,从而可以利用细胞的同源重组和非同源末端结合机制来进行基因组的编辑,如基因的敲入、敲除和定点突变。 美格生物crispr cas9基因编辑技术服务周期 1.gRNA载体设计和构建(1周) 2. gRNA和Cass9体外转录(1周) 3. mRNA显微注射受精卵(1月) 4. F0小鼠制作(2月) 5. ...
实验目的:使用CRISPR-Cas9系统敲除小鼠P53基因,获得P53基因敲除小鼠模型。实验原理:Cas9蛋白与特异性sgRNA在体内形成复合物,识别并切割P53基因的指定位点,经过细胞修复最终导致基因敲除。实验材料:1. Cas9质粒(px458)和sgRNA质粒:分别表达SpCas9和sgRNA;2. 用于胚胎注射的Cas9 mRNA和sgRNA;3. 小鼠原代成纤维细胞(MEF)...
带有 Loxp 片段的小鼠获得 Cre 酶后,可以在特定的组织或细胞中敲除两端带有 Loxp 片段的目的基因。 条件性基因敲除(CKO)原理示意图 应用:构建在特定组织或细胞中敲除特定基因的敲除鼠;适用于构建具有胚胎致死性的基因敲除鼠;研究基因在特定组织的功能与作用。 举例:若需要研究某基因 A 在神经系统中的功能,则可以构...
加上近些年魔术剪刀——CRISPR/Cas9 基因编辑技术的出现,让基因编辑小鼠变成了触手可得的科研头牌明星。 那么这把神奇的剪刀是如何起作用的呢?来看看在基因编辑小鼠中的应用吧。 第一步 确定修饰的目的基因 构建小鼠前,需要先明确研究涉及的基因。一般分为 2 种情况: ...
目的利用成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白核酸酶9(CRISPR-associated nuclease 9,Cas9)基因编辑技术构建稳定遗传的脂多糖结合蛋白(lipopolysaccaride binding protein,Lbp...
CRISPRCas9基因敲除小鼠模型根据基因序列设计合成sgrna针对knockin插入点或点突变位置构建含knockin片段或点突变的同源序列与cas9mrna共同注射到小鼠受精卵胞质cas9核酸酶sgrna基因组靶序列结合并切割双链dna以含knockin的同源序列为模版修复基因组dna最终获得在目的dna序列插入knockin片段或点突变的knockin小鼠 CRISPRCas9基因敲除...
基因敲除技术优势 Cas9X使用新的实验模型将细胞系的敲除效率进行大幅的提升 1. 使用Cas9蛋白和gRNA的复合物直接进行电转，提高效率的同时减少非特异的切割；（目前报道脱靶率最低的方法）2. 使用高效的电转设备，具备更高的电转效率和细胞存活率；3. 使用更先进的单克隆稀释设备和方法，大幅提高阳性率；（提高2倍...
完全性基因敲除小鼠 CRISPR-Pro完全性基因敲除小鼠是通过CRISPR /Cas9基因敲除技术,针对靶基因设计和构建gRNA与Cas9表达质粒,造成目的基因的功能区域被敲除,获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。 CRISPR-Pro完全性基因敲除包括:移码突变、片段基因敲除、双/多基因敲除。
CRISPR-Cas9基因敲除系统 实验流程: 1设计sgRNA 2构建sgRNA-Cas9载体 3构建sgRNA-Cas9稳转株 4 筛细胞克隆并进行qPCR验证 5 阳性克隆测序,选择敲除純合细胞株 6 筛选细胞单克隆测序 实验步骤: 1、设计sgRNA 针对小鼠LIF基因座(Musmusculus,NM_008501)设计了三种sgRNA。进行软件分析以确保sgRNA没有预测的脱靶结合位点...