2. 慢病毒载体的构建及感染宿主细胞：将sgRNA文库进行慢病毒包装，并以较低的病毒感染复数转导至Cas9表达细胞系，确保每个细胞只进入1个病毒，从而实现每个细胞只有一个基因被编辑。3. 阳性或阴性筛选：根据研究目的不同，CRISPR高通量筛选分为阳性筛选和阴性筛选。阳性筛选指施加一定的筛选压力（如药物），经文库扰动...
CRISPR/Cas9技术原理 （Doetschman T et al., Circ Res. 2017）CRlSPR/Cas9gRNA文库筛选是利用CRlSPR/Cas9技术建立的动物全基因组或某类相关基因的gRNA文库，通过慢病毒侵染方式导入目的细胞，对细胞进行编辑，然后功能性筛选和富集细胞，通过NGS测序和生信分析的手段，筛选出具有特定功能的基因。gRNA文库筛选技术具有...
CRISPR-Cas9筛选技术可以应用于药物靶点筛选中，通过大规模筛选技术，可以系统的分析、验证一些与抗药性相关的基因，从而为疾病治疗提供相关数据。SCIENCE发表文章[1]，研究人员利用CRISPR-Cas9文库筛选人类黑色素瘤A375细胞中的18,080个基因进行筛选，最终发现NF2、CUL3等4个基因参与了黑色素瘤A375细胞中的耐药调节过程。
CRISPR/Cas9文库筛选技术可实现全基因组范围的高通量筛选，其针对每个基因设计3-10条sgRNA，利用芯片一次性合成数万条覆盖整个基因组的sgRNA探针，通过克隆构建载体库，经慢病毒包装后以低感染复数感染宿主细胞，使得理论上每个细胞整合一条sgRNA，构建获得覆盖全基因组的基因敲除细胞池；经过筛选后，提取基因组并针对整合...
首先,让我们了解Crispr文库筛选的原理。CRISPR/Cas9基因编辑技术是由Cas9蛋白(一种核酸酶)和sgRNA(向导RNA )构成的RNA―蛋白复合体,可利用sgRNA 识别并结合特定DNA序列,引导Cas9蛋白在目的基因特定区域进行切割,由于细胞内的非同源性末端连接机制(nonhomologous end joining, NHEJ)和同源重组修复机制(homologous recombinati...
Srinivas等人在Oncogene杂志上发表“PLK1 inhibition selectively induces apoptosis in ARID1A deficient cells through uncoupling of oxygen consumption from ATP production”,该研究通过高通量化学筛选发现肿瘤抑制因子ARID1A缺失的细胞对PLK1抑制非常敏感。相反,Brunello慢病毒sgRNA表达文库筛选表明,ARID1A缺陷细胞对PLK1抑制...
细胞表型筛选 NGS测序验证功能基因 CRISPR-Cas9文库应用方向 1、药物靶点确定与验证 CRISPR-Cas9筛选技术可以应用于药物靶点筛选中,通过大规模筛选技术,可以系统的分析、验证一些与抗药性相关的基因,从而为疾病治疗提供相关数据。SCIENCE发表文章[1],研究人员利用CRISPR-Cas9文库筛选人类黑色素瘤A375细胞中的18,080个基因...
CRISPR/Cas9文库筛选原理: 用于高通量筛选文库的形式主要有阵列文库和混合文库两种。前者将单个或数个sgRNA列于芯片或多孔板中进行处理,每孔中的基因编辑序列已知;后者则是用计算机设计待筛选sgRNA文库并富集阳性克隆,随后转至宿主细胞以引入各种基因突变,最终通过高通量测序等方法获得结果。相比之下,混合文库筛选成本低...
CRISPR/Cas9文库筛选通过计算机设计多个基因的sgRNA，组成sgRNA文库，将其包装为慢病毒并转导至宿主细胞，引入各种基因突变。在细胞培养过程中施加筛选条件，导致部分细胞死亡，通过高通量测序等方法获取存活细胞中富集的sgRNA，鉴定影响表型的候选基因。CRISPR/Cas9文库筛选流程包括sgRNA文库设计与合成、慢病毒载体...
图5:聚焦CRISPR/Cas9筛选确定EHMT1和EHMT2敲除对HDAC抑制剂的增敏作用。 Leonhard Valentin Bamberg et al., Int. J. Cancer. 2022;151:1586–1601. 和元生物可提供本文所涉及的定制文库筛选及慢病毒包装服务 和元生物常用文库列表 和...