CRISPR/Cas9技术通过筛选对免疫治疗至关重要的基因、对相关基因进行基因水平改造等手段,为免疫疗法带来了新的突破。 CAR-T疗法可通过在对T细胞进行基因工程手段体外修饰改造后,使T细胞不依赖人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen, HLA)也可以靶向识别并杀伤肿瘤细胞,Andrew教授使用全基因组CRISPR/Cas9筛选,发现T细胞受体...
为了解决这一难题，一组日本研究者通过CRISPR/Cas9全基因组筛选，鉴定了与药物耐受性持续相关的基因。他们使用了携带RET融合的患者来源的细胞，引入了sgRNA库，并在RET-TKI的作用下进行了为期9天的处理，最终发现了多个候选基因。特别是，MED12或MIG6的敲除显著增加了在RET-TKI处理下存活的药物耐受性细胞。（二）CRIS...
利用CRISPR/Cas9全基因组敲除技术筛选在稳态细胞密度下抑制分裂增殖的基因 紧接着，研究人员在4000万个上皮细胞中进行了CRISPR/Cas9全基因组敲除筛选，并通过上述这种强大的检测方法选择那些在低密度下正常增殖但在高密度下继续分裂的细胞。他们惊奇地发现，TRAF3的缺失会激活增殖信号通路，进而推动细胞的分裂。 TRAF3基...
近年来, 全基因组CRISPR/Cas9筛选技术在哺乳动物细胞上得到广泛应用,可以找出毒素和病原菌感染人和动物时的宿主因子,从而帮助我们寻找防治感染的策略。 与此同时,科学家也希望将这一手段用于昆虫细胞。在自然界中,存在许多专门靶向昆虫的细菌蛋白毒素,有些已经被应用于农业害虫防治。如果能利用CRISPR/Cas9筛选技术揭开这...
CRISPR/Cas9文库筛选基本流程 1. sgRNA文库的设计与合成：确定待研究的基因列表，选择合适的sgRNA设计软件（如CRISPR-FOCUS、CHOPCHOP、CRISPR library designer（CLD）、Cas-designer等）。为确保基因能够被编辑，每个基因一般设计4-6个sgRNA。2. 慢病毒载体的构建及感染宿主细胞：将sgRNA文库进行慢病毒包装，并以较低...
现有的CRISPR/Cas9筛选技术依赖针对哺乳动物细胞的慢病毒转染系统，不适用在昆虫细胞上，大大限制了人们对针对昆虫的蛋白毒素作用机制，抗性，宿主特异性以及开发新型杀虫毒素等问题的研究。这项工作建立了在昆虫细胞上开展非病毒的全基因组CRISPR/Cas9筛选毒素受体的方法，为应用全基因组筛选这一关键技术来研究多种多样的...
CRISPR/Cas9 基因编辑技术的全基因组筛选具有高通量和高效率的特点,已被广泛应用于基因功能、转录调控等研究,为研究疾病机理和药物开发等提供了依据。 CRISPR/Cas9文库筛选基本流程 1. sgRNA文库的设计与合成:确定待研究的基因列表,选择合适的sgRNA设计软件(如CRISPR-FOCUS、CHOPCHOP、CRISPR library designer(CLD)、Cas...
为了解决这个问题，我们使用了全基因组CRISPR-Cas9筛选方法寻找治疗AML最有效的靶点。研究过程 构建了全基因组 CRISPR Screen 文库（靶向19,050个蛋白编码基因及1864 microRNA前体基因的123，411个sgRNAs），转染 THP1 AML 细胞系进行全基因组 CRISPR 筛选（通过MOCK及OG-86 (LSD1 抑制剂：Oryzon Genomics, compound...
2.1 CRISPR/Cas9技术专业名词 图2即为一个CRISPR/Cas9技术在编辑基因时的原理图。我们以图2为例,分别介绍:CRISPR序列、Cas9酶、导向RNA(gRNA)、目标识别、DNA切割、DNA修复。 CRISPR序列:CRISPR是细菌基因组中的一种特殊DNA序列,由重复的短序列组成,这些...
1、Human CRISPR Knockout Pooled Library (Brunello)一、 lentiCas9-Blast质粒的基本信息:/pooled-library/broadgpp-human-knockout-brunello/由于cas9自待的抗性基因是我们不需要,在抗性基因两边突变出酶切位点,酶切掉原本的抗性基因。换成另一种。1. lentiCas9-Blast质粒购买来时是以细菌的形式存在的,先需要...