使用LentiPool CRISPR 文库进行经济实惠的筛选 LentiPool CRISPR 文库无需高通量基础设施即可进行 CRISPR-Cas9 筛选。这些高质量的混合慢病毒文库涵盖与我们的 LentiArray 文库相同的基因靶点,以即用型高滴度(>1 × 108TU/mL)慢病毒颗粒的形式提供,用于影响更高的基因敲除筛选。
Cas9X 海星生物一站式CRISPR文库筛选方案，包括sgRNA文库定制、文库质粒构建、文库质粒慢病毒包装、 CRISPR文库筛选、高通量测序与生信分析。此外，具有现货人和小鼠的全基因组敲除文库 举报/反馈
5. 验证候选基因:用 CRISPR/Cas9 技术筛选出若干个候选基因后,需要通过一系列方法进行验证,从而鉴定出调控特定表型的功能基因。首先需分析其脱靶情况,若脱靶标位点在外显子内可能导致假阳性结果。然后使用 CRISPR/Cas9技术进行单个基因敲除,通过筛选单克隆细胞构建候选基因敲除细胞系,在基因分型和免疫染色确认基因已被...
CRISPR/Cas9文库筛选技术可实现全基因组范围的高通量筛选，其针对每个基因设计3-10条sgRNA，利用芯片一次性合成数万条覆盖整个基因组的sgRNA探针，通过克隆构建载体库，经慢病毒包装后以低感染复数感染宿主细胞，使得理论上每个细胞整合一条sgRNA，构建获得覆盖全基因组的基因敲除细胞池；经过筛选后，提取基因组并针对整合...
图3. ATLL细胞系的全基因组敲除文库筛选确定9个关键基因(PMID: 34818414) 02 线粒体自噬 2022年9月,Jonas Benjamin Michaelis等人在nature communications上发表“Protein import motor complex reacts to mitochondrial misfolding by reducing protein import and activating mitophagy”,该研究发现由前序列易位酶相关运...
1)筛选肿瘤发生发展的相关基因:CRISPR/Cas9文库可筛选维持肿瘤细胞生长发育的相关基因,从而针对这些靶基因进行肿瘤机制研究和治疗。重庆医科大学实验室[2]通过在SK-Hep1肝癌细胞系中建立AT富集作用域2(ARID2)基因敲除模型,发现ARID2通过靶向pRb-E2F信号通路抑制cyclinD1和cyclinE1的表达进而抑制肝癌细胞增殖,证实ARID2作为...
CRISPR/Cas9全基因组敲除文库筛选鉴定出MAPK通路中的SHP2是茶叶素诱导细胞凋亡的关键靶点。细胞热位移实验(CETSA)和表面等离子体共振(SPR)实验进一步证实了SHP2与茶叶素直接结合。通过SHP2敲低或药理抑制SHP2/SOS1/MAPK通路明显减弱了茶叶素诱...
A. 全基因组CRISPR/Cas9敲除文库筛选的工作流程 将含有65386个sgRNAs的人类全基因组CRISPR/Cas9敲除文库(GeCKO v2A)包装到慢病毒颗粒中,以低感染多重性(MOI)转染过表达Cas9的MHCC97L细胞(MHCC97L-Cas9)。用嘌呤霉素选择sgRNA转导的细胞产生突变细胞池。突变细胞在载体和索拉非尼中培养7天进行遗传筛选。从处理过的...
CRISPR/Cas9全基因组敲除文库筛选鉴定出MAPK通路中的SHP2是茶叶素诱导细胞凋亡的关键靶点。细胞热位移实验(CETSA)和表面等离子体共振(SPR)实验进一步证实了SHP2与茶叶素直接结合。通过SHP2敲低或药理抑制SHP2/SOS1/MAPK通路明显减弱了茶叶素诱导的细胞凋亡和自噬抑制。茶叶素通过触发细胞凋亡来克服耐药性,这提示茶叶素...
本研究采用了猪全基因组CRISPR/Cas9高通量筛选的方法挖掘乙型脑炎病毒(JEV)抗性关键宿主因子,制备猪全基因组敲除筛选工具,建立猪全基因组CRISPR/Cas9敲除筛选平台,为筛选猪重要性状的功能基因提供理论基础。本研究采用JEV筛选模型为例,为筛...