CRISPR-Cas12a是CRISPR-Cas12家族中使用最频繁的一种,由于顺势疗法和反切割特性,它为生物传感器设计提供了多种选择。由于受体可用性和实用性的限制,基于CRISPR-Cas12a的生物传感器的特异性和灵敏度还有待进一步提高。此外新开发的基于CRISPR-Cas12a的应用和方法推动...
“CRISPR/Cas12a”是一种新型的RNA引导的核酸内切酶,可以作为“CRISPR/Cas9”系统的替代工具,该系统主要包含crRNA和Cas12a蛋白两部分,crRNA能特异性识别并结合特定的DNA序列,从而引导Cas12a蛋白到相应位置剪切DNA。下图1表示两种系统工作原理示意图,PAM是Cas蛋白识别和结合的一段短核苷酸序列,是目标DNA的sgRNA或crRNA与...
cas12a是一个多功能蛋白，包含RNA结合域、核酸酶域和DNA结合域。其中核酸酶域具有DNA内切酶活性，可以在激活后非特异性地切割DNA。3. 指导RNA: cas12a需要与crRNA结合才具有活性，crRNA与其靶DNA互补的序列决定了cas12a的识别靶向性。多个crRNA可以共同作用于一个cas12a。4. 活性调控: 在结合crRNA前，cas12a处于不...
Cas12a属于CRISPR/Cas系统,具有被开发为基因组编辑技术的巨大潜力。CRISPR/Cas12a系统产生切割必须满足三个条件:Cas蛋白、crRNA和PAM。Cas蛋白是发挥识别、切割功能的蛋白,crRNA为靶向指引,PAM是CRISPR/Cas系统区分自我和入侵者的标记。Cas12a蛋白由1200~1300个氨基酸组成,略短于SpCas9(来源于Streptococcus)的1368个氨基酸。
Cas12a又称为Cpf1,Class 2类CRISPR系统,与Cas9一样通过识别特异性PAM序列行使核酸内切酶功能从而产生DNA双链断裂。与Cas9系统在crRNA加工、PAM识别机制、切割方式等方面存在明显不同(表1)。Cas12a因其独特的作…
CRISPR/Cas12属于2类V型RNA引导的核酸内切酶。该蛋白家族中研究较多是Cas12a核酸酶，目前最常用的Cas12a蛋白来自氨基酸球菌属的BV3L6菌株和毛螺科细菌(LbCas12a)。Cas12a蛋白已被广泛应用于包括细菌、酵母、植物和人类细胞在内的多个物种。Cas12a蛋白由向导RNA引导剪切带有特异性序列的双链dna(dsDNA)。与Cas9蛋白一...
Cas12a是V-A型CRISPR-Cas免疫系统的效应蛋白，其特异性由于潜在的脱靶效应一直是体外和基因组编辑实验中广泛研究的主题。先前的一些报道指出，Cas12a的特异性有可能在生理条件下发生改变。特别是，细胞中游离镁离子的浓度通常会低于体外研究中镁离子使用的浓度。对此，研究人员们期望做出进一步研究以了解这种情况下的Cas...
CRISPR Cas12a(Cpf1)可以反式切割ssDNA,该特征已被广泛用于核酸检测。 在这里,我们介绍了一种新型的Cas12a报告基因,G-triplex(G3)和一种称为G-CRISPR的高灵敏度生物传感器。 我们证明CRISPR Cas12a可以在约10分钟内反式切割G3结构,利用这种切割诱导的高级结构破坏方式,G3可以作为出色的报告子。